3,5-二硝基水杨酸(dns)法测定还原糖.doc

3,5-二硝基水杨酸比色法----。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖10257RP麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计,在540nm波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,。、:红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、旋转蒸发后红曲黄色素液。:具塞玻璃刻度比色管:25mL×19;烧杯:100mL×4;三角瓶:100mL×1;容量瓶:100mL×3,50mL×3;刻度吸管:1mL×4;2mL×3;10mL×1;沸水浴;冰浴;扭力天平;UV—2802SH型紫外可见分光光度计尤尼柯(上海)仪器有限公司;℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg,置于小烧杯中,加少量蒸馏水溶解后,转移到100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至100mL,混匀,4℃冰箱中保存备用。3,5-二硝基水杨酸(DNS),加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000mL,贮于棕色瓶中备用。,按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂,配成不同葡萄糖含量的反应液。表1葡萄糖标准曲线制作管号1mg/mL葡萄糖标准液(mL)蒸馏水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD540nm)    ,在沸水浴中准确加热5min,取出,冰浴冷却至室温,用蒸馏水定容至25mL,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上进行比色。调波长540nm,用0号管调零点,测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为横坐标,做出标准曲线。蒽***比色法测糖一目的掌握蒽***比色法测糖的原理和方法二原理蒽***比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽***可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应,反应后溶液呈蓝绿色,在620nm处有最大吸收。本法多用于测定糖原的含量,也可用于测定葡萄糖的含量。三实验器材及试剂马铃薯干粉可调试移液器或移液管可见分光光度计(723型)电子分析天平水浴锅电炉子蒽***试剂:取2g蒽***溶解到80%H2SO4中,以80%H2SO4定容到1000ml,当日配制使用。标准葡萄糖溶液():100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中,定容到1000ml备用。四、,按表1顺序加入试剂,进行测定。以吸