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山东大学博士学位论文 Ghrelin对匹罗卡品致痫大鼠海马神经元的保护作用专业:神经病学研究生:徐婧婧导师t迟兆富教授中文摘要癫痫是一种严重的神经系统疾病,给社会、家庭和个人都带来了沉重的负担。我国目前约有900万癫痫患者,其中约25%为难治性癫痫。颞叶癫痫(temporal lobeepilepsy,TLE)是最常见的难治性癫痫,其发病机制目前尚未完全清楚,药物及手术治疗均难以取得明显的疗效。***、脑电图和海马神经元损伤的病理学改变均与人类颞叶癫痫相似,因此是目前研究癫痫持续状态(status epilepticus,SE)和TLE的常用模型。癫痫发作能造成神经元损伤己被广泛认可,但癫痫发作致神经元损伤的分子机制目前仍不十分清楚。鉴于癫痫病因及发病机制的复杂性,探索新的神经保护药物及其潜在的作用机制是目前癫痫研究的热点。 ,主要由胃底粘膜分泌。它可以通过其功能性受体GHSR-la作用于垂体和下丘脑刺激生长激素释放、促进食欲和增加体重。此外,大量的研究证实ghrelin在一些细胞中可以介导抗凋亡作用。近年来对ghrelin神经保护作用的研究也日益深入,如ghrelin可抑制缺氧低糖引起的下丘脑神经元损伤,并且对脑缺血再灌注后的大鼠皮层和海马神经元具有保护作用。研究提示ghrelin可以通过激活P13K/Akt信号通路及抑制线粒体凋亡通路发挥抗凋亡作用。 Ghrelin具有抗凋亡及神经保护作用已被广泛认可,但其是否能在癫痫引起的海马神经元损伤中发挥保护作用目前研究还很少。为此,本课题建立***化锂. 匹罗卡品致痫大鼠模型,探讨癫痫发作后海马神经元损伤的病理学特征;检测匹罗卡品致痫后及腹腔给予外源性ghrelin后大鼠海马信号转导通路及线粒体凋亡山东大学博士学位论文通路相关蛋白水平的变化,以此深入研究癫痫发病的分子生物学机制、探讨 ghrelin的抗癫痫作用及潜在的机制。本研究分三个部分: 第一部分***化锂一匹罗卡品大鼠癫痫模型的建立及脑电图、海马神经元损伤的病理学观察目的观察***化锂一匹罗卡品致痫大鼠行为学、电生理及海马病理学改变,探讨癫痫发作引起的海马神经元损伤。方法成年雄性Wistar大鼠腹腔注射***,观察大鼠行为学变化。SE持续60 min后腹腔注射***终止发作。在致痫后2 h对大鼠进行脑电图(EEG)描记,观察大鼠脑电活动的改变。癫痫发作后72 h用多聚甲醛灌注取脑,石蜡包埋切片,HE和Nissl染色观察大鼠海马神经元的损伤。勿七甲皇口木 1.***%(根据Racine发作评分标准, 达到Ⅳ.V级发作的大鼠被认为成功诱发SE,表现为双侧前肢阵挛、,双侧后肢强直、身体背曲强直、跌倒),%。 h(急性期)大鼠皮层和海马区的EEG均表现为丛集性棘波放电。 :正常大鼠海马CAl和CA3区锥体细胞结构清晰完整, 细胞核结构正常,染色质分布均匀,胞浆内尼氏小体丰富。癫痫发作后72 h大鼠海马CAl和CA3区部分神经元脱失、细胞排列紊乱,胞质浓缩,核固缩,胞浆内尼氏小体减少。结论根据******(即SE),***。 2 山东大学博士学位论文关键词癫痫;癫痫持续状态;匹罗卡品;海马;神经元损伤第二部分***化锂一匹罗卡品致痫大鼠海马P13K/Akt信号通路以及凋亡相关蛋白水平的变化目的研究***、,进一步探讨癫痫后大鼠海马神经元损伤的分子生物学机制。方法成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、癫痫发作后2 h、8 h、16 h、24 h 和72h组。在相应的时间点断头取脑,分离海马,提取蛋白,用Westernblot法检测各组大鼠海马磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol·3·kinase, p85)、磷酸化Akt(phospho-Ala)、 Bax、。钴甲=目7代 —P13Kp85和phospho-Akt的水平在癫痫发作后2 h和8 h明显的反应性增高(p<),而8 h后则逐渐下降并且于发作后16 h开始显著低于正常对照组的水平(p<)。