实验六抗体效价的测定.ppt

实验六抗体效价的测定
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免疫酶技术:酶标Ab/Ag,酶结合物的酶在免疫反应后，作用于厎物后显色，根据颜色的有无和深浅，定量测定Ab/Ag。
免疫反应：一次或数次 具Ag,Ab特异的免疫学反应
酶促反应：只进行一次
显示出生物放大作用，灵敏度ng,pg
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60年代初期，Averameas & Ram等
建立了免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
利用特殊的交联剂研制出辣根过氧化物酶---人血清白蛋白及酸性磷酸酯酶---抗体，统称为酶标记物或酶结合物，用于抗原或抗体的示踪、定位或定量测定
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酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay简称为Elisa)-----是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。本法兼有灵敏度高和特异性强两方面的优点。
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1974年 Voller等
用聚苯乙烯微量反应板作为免疫吸附剂吸附抗体(抗原)，再与相应的酶标记物结合
操作更方便，易重复
灵敏度可高达ng（10-9g）至pg(10-12g)，
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(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
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免疫标记技术
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应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定
标记抗体或抗原
荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂
镜检观察或进行自动化测定
荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等
直接在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上,对抗原抗体反应进行定性和定位研究
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酶------性能稳定、经济易得、底物无色、产物显色，便于检测
常用的酶:碱性磷酸酯酶、辣根过氧化物酶(horserad peroxidase简称HRP)、葡萄糖氧化酶、半乳糖苷酶等。
酶标技术
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戊二醛法， 过碘酸氧化法
将酶与Ab交联在一起
Ag-Ab-抗Ab-HRP
TMB+H2O2
产物（黄色，OD450)+H2O
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