土壤纤维素酶活性测定二硝基水杨酸比色法.docx

土壤纤维素酶活性测定二硝基水杨酸比色法.docx土壤纤维素酶活性测定（ 3,5- 二硝基水杨酸比色法）
一、原理
纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。 在纤维素酶作用下， 它的最
初水解产物是纤维二糖， 在纤二糖酶作用下， 纤维二糖分解成葡萄糖。 所以，纤维素酶是碳
素循环中的一个重要的酶。纤维素酶解所生成的还原糖与 3,5- 二硝基水杨酸反应而生成橙
色的 3-氨基 -5- 硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖
酶的活性。
二、试剂
1）甲苯
2） 1%羧***纤维素溶液：
1g 羧***纤维素钠，用
50%的乙醇溶至 100ml 。
3） 醋酸盐缓冲液：

醋酸溶液
95%
冰醋酸溶至 1L；

醋酸钠溶液
C H
O Na 或 C H
3
O
2
O 溶至 1L；
2
3
2
2
2
取 11ml
醋酸溶液和 88ml
醋酸钠溶液混匀即成
PH 醋酸盐缓冲液。
4）3,5-二硝基水杨酸溶液： 称
二硝基水杨酸， 溶于 50ml 2mol/LNaOH
和 125ml 水中，
再加 75g 酒石酸钾钠，用水稀释至
250ml （保存期不过
7 天）。
5）葡萄糖标准液（ 1mg/mL ）
预先将分析纯葡萄糖置
80℃烘箱内约 12 小时。准确称取
50mg 葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水
溶解后，移至 50mL
容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中
4℃保存期约一星期） 。若该溶液发生
混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
三、操作步骤
葡萄糖标准曲线：分别吸
1mg/mL 的标准葡糖糖溶液
0、 、、 、 、 于
试管中，再补加蒸馏水至
1mL ，加 DNS 溶液 3ml 混匀，于沸腾水浴中加热
5min ，取出立即
泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长
540nm 处比色，以
OD 值为纵坐标，以葡萄糖
浓度为横坐标绘制标准曲线。