线粒体通透性转换调控对心肌细胞缺氧复氧损伤的作用研究论文.pdf

中国医科大学
博士学位论文
线粒体通透性转换调控对心肌细胞缺氧复氧损伤的作用研究
姓名:李敬远
申请学位级别:博士
专业:麻醉学
指导教师:曾因明
20070401
论文作者签孝≥≤孚凄劬:论文作者签名:鞭风指导教师签名:蚺中国医科大学研究生学位论文独创性声明中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导炜为通讯作者,,允许论文被查阅和借阅。,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,以采用影印、
抑制线粒体通透性转换对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用·中文论著摘要一·目的线粒体功能障碍在心肌细胞应激性损伤中占有重要地位,近年研究发现线粒体的功能障碍和线粒体通透性转换孔道刺芮邢喙兀琺7诺贾碌南吡L逋ㄍ感宰;,被认为是调控细胞死亡或生存,以及凋亡或坏死的重要环节。是由位于线粒体膜上多蛋白组成的非选择性复合孔道,其主要由外膜的电压依赖性阴离子通道,内膜的腺苷酸转位子实那谆蛋白狣槌伞W罱芯咳衔M庵鼙蕉t∈芴,、已糖激酶、肌酸激酶可能也参与的构成。谙赴应激状态缪趸ぁ⑸ひ蜃尤コ虮┞队谙赴史至衙时起到“中央执行者”的作用。贾孪吡L迥さ缥幌陆怠⒀趸姿峄怦盍!损耗、小分子溶质和离子在细胞质和线粒体基质问的平衡。溶质内流入线粒体基质导致线粒体基质膨胀,外膜破裂,线粒体内膜蛋白释放,包括细胞色素眂。牡骺囟晕窒吡L迥谀さ不通透性硕砸恍┭≡裥缘拇晃起到重要作用,以维持线粒体膜电位,保证氧化磷酸化过程中暮铣伞谛募∪毖T俟嘧⑺鹕酥衅鹱胖匾W饔茫孀湃毖J奔溲映ぃ吡L宸生那痹诳赡苄栽黾樱莆狹启动锥危欢俟嘧⒌奶跫梢调节芊癖淮シⅲ莆狹触发锥巍H毖H毖跗诩湎赴贑撸值下降,长链脂肪酸增多,舳疢。シ⒔锥危再灌注期间盏迹种埔蛩尤其是基质和的相互作用和再生膜蛲鲇盏家蜃、核酸内切酶。
实验材料实验方法⑹笛槎锛爸饕J约⒅饕R瞧⑿募∠赴嘌电位的电子传递能力的影响,而后者对缺血期间的Ш湍谀ねㄍ赋潭雀叨让感。因为的开放是电压依赖性的,当暂时关闭时电子传递再生膜电位的速率决定了保持开放还是关闭。膜间隙量和内膜通透性是控制电子传递再生膜电位速率的决定性因素,所Ш湍谀ねㄍ感栽黾油ü种颇さ缥恢复速率,使暂时关闭的再开放的概率增加。而且募又匮趸ぃ进开放。由于斐傻南吡L宀豢赡娴娜ゼɑ钪胀ü苹的芰坎致细胞坏死,心脏要从缺血再灌注损伤中恢复,首先必须要恢复粒体功能。因此,本研究的目的是探讨抑制⒍孕募∠赴毖酰囱跛鹕说挠跋臁男律鶶恐执蟀资螅菩鄄痪校尚熘菀窖г实验动物中心提供。环孢菌素购自公司。鼠单克隆抗公司,辣根过氧化物酶标记标记的的抗小鼠鹤尽鹤悦拦鶶公司,线粒体/胞浆蛋白分离试剂固骞鹤愿V萋跣鹿荆标记的山羊抗小鼠吐薜っ鞅昙堑纳窖蚩剐∈驣抗体购自中山生物科技公司,凋亡检测试剂盒购自凯基生物制品有限公司。魇较赴美国琇す夤簿劢瓜晕⒕德国贤夥止夤舛燃荆毡;;低温离心机毡綡术籌取新生大鼠心室肌,用胰酶和胶原酶消化,将细胞重悬于含%新生牛血清的培养液。为纯化心肌细胞,采用差速贴壁分离法去除贴壁的非心肌细胞。出生固骞鹤許盒鹤訟荆琈固搴蚑美国。
心肌复氧后鑜州实验结果⑹笛榉肿⒐鄄熘副⑼臣蒲Т将细胞稀释成适当浓度的细胞悬液,按个,密度接种于用ッ鹘浩痰椎溴脱氧尿苷抑制非心肌细胞增殖。将原代培养心肌细胞按孔随机分为五组。椋赫6哉兆椋挥枞毖酰氧,而与其他组同步换液,所换培养基为无血清高糖;疪组:缺氧复氧组,心肌细胞缺氧籆椋盒募∠赴毖跚种萍;组:心肌细胞复氧前鑜复氧螅捎昧魇较赴跫觳庑募∠赴蛲銮榭觥肌细胞线粒体色素头拧8囱后,采用/法染色线粒体,激光共聚焦显微镜成像,观察的开放情况。∠。、。,组胞浆暮棵飨缘陀贏//槲廾飨圆钜臁镃保留在线粒体内,胞浆荧光强度较弱,提示纯7拧/镃从线粒体释放到胞浆,胞浆荧光强度