GS115毕赤酵母表达菌使用说明.doc

GS115毕赤酵母表达菌使用说明.docGS115毕赤酵母表达菌
编号
名称
北京华越洋生物NRR01030
GS115毕赤酵母表达菌
基本信息:
名称：GS115毕赤酵母表达菌
规格：300ul甘油菌
储存温度:-80°C
基因组：
His4 （基因型），Mut+ （表型） 简介：
GS115是毕赤酵母菌株，是巴斯德毕赤酵母的一种，属于真核细胞。 一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨节对酵母是无效的，因此为了 防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一 些氨节和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。GS115毕赤酵 母自身表型为Mut+,但是GS115转化株既能够产生出Mut+菌株，也能够 产生出Muts菌株。目的蛋白在这两种转化株的表达水平可能是不同的， 并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到最好的酵母表达方案。
毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，温度超过32度对蛋白的表 达是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115毕赤酵母是是组氨酸缺陷型 （His4基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组 氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自 发突变为组氨酸野生型的概率一般低于GS115毕赤酵母可以在YPD 培养基中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法 在单独的minimal media中生长。GS115毕赤酵母在做质粒转化的时候， 可采用电转化的方式将质粒转入。
操作说明：
本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表 面旌取少屋涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数 的增加，细菌的活力会逐渐下降。
为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽最先划平板，然后再挑单克隆 菌落进行后续操作。
冷冻管开封：
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml左右复溶液，加入到冷冻 管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培 养。细菌在30-35°C培养箱中培养24-48h,真菌在23-28°C培养箱中培养24-72h （必要时，可适当延长培养时间）。
菌株传代：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量 增大接种帚:：如用无菌吸管吸取M50M新鲜培养物至固