M15大肠杆菌菌株使用说明.doc

M15大肠杆菌菌株使用说明.docM15大肠杆菌菌株
编号
名称
北京华越洋生物NRR00930
M15大肠杆菌菌株
基本信息：
名称：M15大肠杆菌菌株
规格：300ul甘油菌
储存温度:-80°C
基因组：
M15[pREP4]genotype:derived from a strain K12, Nals strs riP thi* lac* ara gal* mtl F- recA* uvr* ion* [pREP4 KanR], resistance: kanamycin, source: Qiagen 简介：
M15菌株细胞含有包含反式lac抑制子的pREP4质粒，保证高度调控 的表达。M15[pREP4]菌株携带有阻抑质粒pREP4,该质粒高水平的表达lac 抑制子， 持pREP4质粒在菌株中的稳定性。对M15使用LB,在379有氧的环境下 培养，42「C热激处理可将质粒成功转入M15中，通常的情况下，使用IPTG 可使菌株进行高效的蛋白表达。
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表 面薩取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数 的增加，细菌的活力会逐渐下降。
为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划半板，然后再挑单克隆 菌落进行后续操作。
冷冻管开封：
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml左右复溶液，加入到冷冻 管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培 养。细菌在30-35"C培养箱中培养24-48h,真菌在23-28°C培养箱中培养24-72h （必要时，可适当延长培养时间）。
菌株传代：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽最 增大接种屋：如用无菌吸管吸取250M新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓 慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
注意事项:
1、