primer_5.0使用方法 使用说明.doc

中文使用说明 key 5685 Primer Premier Premie r公司开发的专业用于 PC R或测序引物以及杂交探针的设计,评估的软件,和 Plasmid 一起是该公司推出的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口( ank ),引物设计窗口( Primer Design ),酶切分析窗口( Restriction Sites )和纹基分析窗口( Motif )。这里我们主要介绍其引物设计功能,其他功能的介绍请参看 Plasmid 。打开程序首先进入的是序列编辑参看,与 Plasmid Premier 相比, 其多了一个语音校正的功能,即在输入序列的时候,程序自动将碱基读出,以便用户进行校正,保证输入的正确和快速。点击该界面的按钮即可进入到程序的引物设计窗口。该界面共分为四层,最上面一层左面是 5个控制按钮,用于实现引物设计中的各种功能,包括引物自动寻找,寻找结果查看和引物编辑;右边是观察两个引物在模板上结合位置的直观图以及对正链还是负链引物进行选择;第二层是显示模板和引物序列及二者间的配对情况的显示;第三层是显示两个引物的各种参数,包括给引物的打分,引物以及产物的起始位置、长度、 Tm值、 GC%消光系数、简并性;最后一层是给出的有关于引物的二聚体结构、发卡结构、错配情况和引物间二聚体结构的预测,左边是显示是否存在以上各种对 PCR 扩增有影响的结构, 右边显示的是这些结构的位置,结构细节和稳定能,利用这些参数可以对引物作出可靠的评价。下面是根据模板序列寻找引物的界面,在该界面中可以设定所要搜索的引物的类型,包括 PCR 引物,测序引物和杂交探针以及引物所在的链;另外也能设定搜索引物的范围,以及最终 PCR 产物的长度和引物的长度等。并通过来点击按钮来设置一些搜寻参数: 这些参数包括引物的 Tm值, GC比,有简并性碱基, 3’端稳定性,引物的稳定性,重复序列,二聚体/发卡结构和与模板及可能的杂质 DNA (需要从另外的序列文件中读入)之间的错配情况,这些参数的设定可以根据要求变化,程序本身根据一定的标准分成从极高严谨性到极低严谨性 5个档次。该程序对引物的自动搜索过程是采用的排除法,根据用户设定的引物范围和产物长度所规定区域内,所有的符合设定的引物长度的寡核苷酸都被视为可能的引物,然后根据以上各个参数逐步去除不符合条件的寡核苷酸,经过这种层层剔除的筛选,最终找到符合用户所设定标准的引物,如果找不到合适的引物可以逐步降低要求来进行进一步搜寻。搜寻到引物结果最终显示在下面的窗口中: 在结果窗口中给出了程序给该对引物的打分(rating )和上下游引物的起始位置和长度以及产物的长度。通过直接点击各对引物在相应引物搜寻界面中相应的显示引物的各种信息。包括其各种参数和各种可能存在的不利结构。其中用 File 菜单中的 Parameter 命令可以对系统参数, PCR 反应条件和程序打分系统进行设置,以帮助用户根据自己的特殊要求来进行引物设计,其中反应条件按照引物浓度,单价离子浓度, Mg离子浓度, Na盐浓度等。而打分系统是参照的以下公式: 利用该打分系统可以为对引物进行有效评估和和在引物之间进行对比选择提供有效的有效的依据。最后还可以在利用引物编