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文档介绍
qPCR引物设计
引物要求：
（1）设计的时候尽量靠近基因的3'端，这样能最大限度地保证扩增效率 （2）尽量跨越内含子，这样可以保证检测有无基因组污染 （3）两条引物的值不要相差太大 （4）产物长度保证在80～200之间，最长300 。
（5）避开保守区域
荧光定量引物设计（）
2021/6/18
2
1.
设计引物网址：
2021/6/18
3
&
输入基因号或序列
定义引物的范围
（举例：针对长3k的基因，若扩增1000-1050的范围，则可填入
– 1 1000, – 1050 3000
若有已知引物，可填入，以测试特异性
针对 ：产物大小填100 200（最大不超过300）
可用默认值（最佳为60度，波动范围57 63度，两条引物差值小于3度）
2021/6/18
4
&
引物是否需跨不同
选择1 - 无所谓
选择2 - 必须跨不同
选择3 - 可以不跨
勾选时表示两条引物之间必须包括一个以上的（当以基因组为模板时）
2021/6/18
5
&
勾选时表示要检测引物的特异性
填入要比较的物种（可输入通用名，如
当需要同时比较多物种时，点击” ”
勾选” a ”》点击” ”
2021/6/18
6
– 结果
2021/6/18
7
专业的定量设计软件：
1 搜索引物保守序列（与转录组比较）
2 设计引物
黄色区域为相对保守序列，设计引物是要尽量避开
2021/6/18
8
专业的定量设计软件：
2 设计引物
2 设计引物
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引物要求：
（1）设计的时候尽量靠近基因的3'端，这样能最大限度地保证扩增效率 （2）尽量跨越内含子，这样可以保证检测有无基因组污染 （3）两条引物的值不要相差太大 （4）产物长度保证在80～200之间，最长300 。
（5）避开保守区域
荧光定量引物设计（）
2021/6/18
2
1.
设计引物网址：
2021/6/18
3
&
输入基因号或序列
定义引物的范围
（举例：针对长3k的基因，若扩增1000-1050的范围，则可填入
– 1 1000, – 1050 3000
若有已知引物，可填入，以测试特异性
针对 ：产物大小填100 200（最大不超过300）
可用默认值（最佳为60度，波动范围57 63度，两条引物差值小于3度）
2021/6/18
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&
引物是否需跨不同
选择1 - 无所谓
选择2 - 必须跨不同
选择3 - 可以不跨
勾选时表示两条引物之间必须包括一个以上的（当以基因组为模板时）
2021/6/18
5
&
勾选时表示要检测引物的特异性
填入要比较的物种（可输入通用名，如
当需要同时比较多物种时，点击” ”
勾选” a ”》点击” ”
2021/6/18
6
– 结果
2021/6/18
7
专业的定量设计软件：
1 搜索引物保守序列（与转录组比较）
2 设计引物
黄色区域为相对保守序列，设计引物是要尽量避开
2021/6/18
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专业的定量设计软件：
2 设计引物
2 设计引物
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qpcr引物设计 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.
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