MicroRNA214对大鼠心肌梗死后心肌纤维化影响.pdf

中文摘要 :心血管疾病是导致中老年死亡的常见原因之一,而心力衰竭是心血管疾病导致死亡的主要原因。在最近几年有关 (miR-214)的研究中,显示出了其在心血管中的重要作用。大量的研究已经展现出在急性心肌梗死中miR-214表达的相对水平是有区别的。我们已经研究了miR-214在大鼠的急性心肌梗死模型中通过磷酸酶. 张力蛋白同源物途径发挥调控左室重塑的作用。此次试验,我们将继续深入的研究miR-214在大鼠模型中急性心肌梗死后心脏纤维化的具体作用: 通过结扎大鼠心脏左冠状动脉的前降支制作急性心肌梗死的模型,心腔注射miR-214的前体及抑制剂来调节miR-214的表达,实时定量PCR验证表达情况,观测不同的miR-214表达水平下胶原相关指标的变化情况。方法: 一心肌梗死大鼠模型的制备及miR-214的调节成年大鼠麻醉后,气管插管接小动物呼吸机辅助呼吸,被皮后逐层开胸,暴露心脏于胸腔外,阻断心脏血流约6秒,向心腔内缓慢注射药物后, 然后结扎左冠状动脉前降支。通过下腔静脉注射依文思蓝的方法证实结扎成功:梗死区的心肌组织是苍白色的,非梗死区的心肌则被染成蓝色。将 80只大鼠随机分成4组:假手术组(穿过线后未做结扎n=20),对照组(结扎前心腔内注射PBS,n=20),miR-214上调组(结扎并心腔内注射miR-214 前体,n=20),miR-214下调组(结扎并心腔内注射miR-214抑制剂,n=20)。于手术后2周和6周取材,观察比较这两个时间段各指标的不同变化。二心重体重比和组织学分析大鼠称重后通过腹腔内注射水合***醛的方法处死,取下心脏,称重后放入10%福尔马林中固定。固定好的样本石蜡包埋,切成5um的厚度放于载玻片上进行马松染色。三PCR和western 取lmm*lmm的梗死边缘区的小块组织,放入EP管中,检测miR-214 中文摘要及mmpl的mRNA的表达及胶原I,胶原III,mmpl和tgf-[31蛋白的表达。结果: 一心重体重比称量每只大鼠的体重(g)和心脏重量(mg)在取材时,计算得出的在2周和6周各组的心重体重比:对照组和前体组,抑制剂组和前体组具有显著的统计学差异。且前一组明显高于后面的一组。这一结果间接表明心肌组织中miR-2 14的表达上调能够抑制急性心肌梗死后的心肌纤维化。与此同时,如果miR-214的表达下调则有利于心肌纤维化的发生。二马松染色选取心肌梗死后6周的大鼠左心室心肌进行马松染色。结果显示:对照组与前体组对比有更多的纤维组织增生,而抑制剂组的胶原增生最明显。三1实时定量PCR 通过RT-PCR验证不同组别之间miR-214的表达水平。在不同的时间段,与前体组相比,对照组miR-214的表达明显增加。相对于对照组和前体组,抑制剂组表达的miR-214最少。并且各组之间具有明显的统计学差异。随着miR-214表达水平的变化,mmpl呈现一个相反的趋势。对照组与前体组的表达具有明显差异,。四western Westem的结果显示除了不同的分组中各项指标的不同表达。在 miR-214表达水平高的分组(前体组),胶原I,胶原III,mmpl和tgf-[31 的蛋白表达是降低的。在2周和6周时,假手术组、对照组、抑制剂组的表达与前体组相比具有显著差异。在2周时,胶原I/III在各组间没有明显差异,而6周时差异明显。总的来说,在miR-214的表达上调组,促进纤维化的各项指标均高于单纯结扎左冠状动脉前降支注射PBS的对照组和下调组。假手术组的表达是最低的。结果表明miR-214能够影响纤维化相关蛋白的表达并且减少心肌的纤维化。结论: 1miR-214对急性心肌梗死心肌纤维化所致的心脏重塑具有保护作用。其表达水平上调时,心重/体重以及胶原的生成具有明显减轻。中文摘要 2miR-214能够通过影响mmpl,胶原I,胶原III和tgf-131的基因及蛋白表达而作用于心脏的胶原形成,抑制其重塑。关键词:心肌梗死,,心肌纤维化英文摘要 MicroRNA-2 14effect on fibrosisafter acute myocardial ■●■on ln ratS Objectives:Cardiovascular diseases iS one mon causes resulting indeathinmiddle aged andagedpeople and cardiac failureisthe major research has shown the critical role of microRNAs(miRNA)in