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猪卵母细胞孤雌激活相关研究摘要本研究以体外成熟猪卵母细胞为材料,用化学激活或电激活方法激活猪卵母细胞,并进行猪卵母细胞孤雌激活的一些相关研究:(1)乙二胺四乙酸钠、能量基质、氨基酸对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响;(2)培养基中添加乙二胺四乙酸钠对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影晌;(3)不同化学激活方法和电激活参数对猪体外成熟卵母细胞孤雌胚发育的影响,旨在研究一种较好的激活猪卵母细胞的方法,并探讨提高猪卵母细胞的核成熟率、激活率和囊胚发育率的方法,为提高猪核移植的成功率提供技术支持。实验结论如下:(1)培养基中能量基质剂量过高会抑制猪卵母细胞的体外成熟;(2)培养基中能量基质+氨基酸的剂量过高会抑制猪早期胚胎的体外发育;(3)成熟液中添加适当浓度(25—10吮M)的EDTA-Na对猪早期胚胎体外发育具有促进作用,当浓度为100*,a时,效果最佳;(4)胚胎培养液中添加适当浓度(25—1O叽M)的EDTA-Na可促进猪早期胚胎体外发育,当浓度为10吮M时,效果最佳;(5)成熟液和胚胎培养液中同时添加10毗MEDTA-Na对猪早期胚胎体外发育具有促进作用;(6)成熟液中添加不同浓度EDTA-Na对猪体外成熟的卵母细胞及4一细胞孤雌胚的SDS—PAGE蛋白质表达种类无显著影响;(7)胚胎培养液中添加不同浓度EDTA-Na对猪4-2111胞孤雌胚的SDS-PAGE蛋白表达种类无显著影响;(8)成熟液和/或胚胎培养液中添加EDTA-Na对猪4一细胞孤雌胚的SDS-PAGE蛋白表达种类无显著影响;(9)对猪体外成熟卵母细胞来说,离子霉素+6一二甲氨基嘌呤的联合处理是较为理想的化学激活方法;(10)4种化学激活方法(乙醇+放线菌酮;氯化锶+放线菌酮;离子霉素+6一二甲氨基嘌呤;乙基汞硫代水杨酸钠+二硫苏糖醇)对猪4一细胞孤雌胚的SDS-PAGE蛋白质表达种类无显著影响;(11)在本实验室条件下,,5吮s、70/“s的脉冲时程均能有效的激活猪体外成熟卵母细胞,其中以50/Ms的脉冲时程较理想。关键词::thefirstpartisacriticalreviewofresearchinthefield:thesecondpartincludesthreesections:(1)etraaceticacid,energysubstrate,icembryos(section1):(2)effectsofEDTA-icembryos(section2):(3)effectsofthedifferentchemicalactivationmethodsandelectro—icembryos(section3>,:(1)relativelyhighconcentrationofenergysubstrateisdetrimentaltoinvitromaturationofporcineoocytes:(2)relativelyhighconcentrationofenergysubstrate+icembryos:(3)additionof100mfEDTA—icembryosinvitro:(4)additionof100州EDTA-icembryosinvitro;(5)additionofIOOPMEDTA—icembryosinvitro;(6)additionofdifferentconcentrationsofEDTA—NatomaturationmediumhadnosignificanteffectonSDS—PAGEproteinexpressionprofilesofporcineoocytesmaturedinvitroand4-icembryos;(7)additionofdifferentconcentrationsofEDTA-NatoembryoculturemediumhadnosignificanteffectonSOS—PAGEproteinexpressionprofilesofporcine4-icembryos:(8)additionofEDTA-Natomaturationmediumand/orembryoculturemediumhadnosignificanteffectonSDS—PAGEproteinexpressionprofilesofporcine4-icembryos:(9)t