高效液相色谱.ppt

高效液相色谱
第一页，本课件共有21页
2022/1/17
第三章高效液相色谱分析法
一、高效液相色谱仪
HPLC
二、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC
三、流程及主要部件
general pr高效液相色谱
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第三章高效液相色谱分析法
一、高效液相色谱仪
HPLC
二、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC
三、流程及主要部件
general process and main assembly of HPLC
第一节高效液相色谱的特点与仪器
high performance liquid chromatograph
feature and instrument of HPLC
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一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph
第三页，本课件共有21页
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液相色谱仪（2）
第四页，本课件共有21页
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液相色谱仪（3）
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液相色谱仪（4）
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二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC
特点：高压、高效、高速
高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
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三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC

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(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。
应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
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(2)梯度淋洗装置
外梯度:
利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。
内梯度:
一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。
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(3) 进样装置
流路中为高压力工作状态，
通常使用耐高压的六通阀进样装置，
其结构如图所示：
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(4) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
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(5) 液相色谱检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。
特点：
灵敏度高；
线形范围高；
流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）；
对流动相的流速和温度变化不敏感；
波长可选，易于操作；
可用于梯度洗脱。
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b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展；
光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
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光电二极管阵列检测器
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c. 示差折光检测器（differential refractive index detector）
除紫外检测器之外应用最多的检测器；
可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；
通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）；
灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；
偏转式、反射式和干涉型三种；
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示差折光检测器
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d. 荧光检测器（fluorescence detector）
高灵敏度、高选择性；
对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合