【对比全集】石蜡切片、冰冻切片、振动切片.doc

【对比全集】石蜡切片、冰冻切片、振动切片
② 液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制锡纸小盒（直径约2cm），可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放人盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始汽化沸腾，此时小盒保持【对比全集】石蜡切片、冰冻切片、振动切片
② 液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制锡纸小盒（直径约2cm），可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放人盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始汽化沸腾，此时小盒保持原位，切勿浸入液氮中，大约10～20秒后组织即迅速冰结成块。取出冷冻的组织块立即置人恒冷箱切片机冷冻切片或置人-80℃冰箱贮存备用。
（2）应用蔗糖溶液：将组织置于20％～30％蔗糖溶液l～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量，可防止或减少冰晶的形成。
2、恒冷箱切片法冷冻后的组织块即可用于恒冷箱切片，其过程包括以下步骤：（1）组织包埋根据研究目的取所需组织（××），用滤纸吸去多余水分，将组织块平放于用特制锡纸小盒（直径约2cm）或软塑瓶盖内。加适量OCT包埋剂浸没组织，40℃浸透20—30分钟。为防止冰晶形成，包埋前可进行蔗糖处理。
（2）组织冷冻：按上述干冰—丙酮（乙醇）法或液氮法冷冻组织。
（3）切片：切片前1小时将恒冷箱切片机的温度设定为-18℃左右，以备切片。切片时温度以-15—-18℃为宜，温度过低组织易破碎。刀的角度要适当否则不易连片。用载玻片贴附组织切片时，勿上下移动。未经固定的新鲜组织在冰冻切片后应使用相应的固定剂固定10分钟。冰冻切片后如不立即染色，必须用电风扇吹干，贮存于-70℃低温冰箱内或进行短暂预固定后低温冰箱保存。染色前从冰箱内取出切片，置室温干燥10分钟，再经冷丙酮固定5～10分钟（未固定者），PBS漂洗3次后即可进入染色程序（HE染色可用甲醛、冰醋酸和95％乙醇快速固定1—2分钟）。
（4）冰冻切片的保存：冰冻切片后如不能及时染色，可在干燥后装入密封的标本盒内，外包塑料袋，贮存于低温冰箱，或进行短暂预固定后于低温冰箱保存。三、振动切片用振动切片机（vibratome）可以把新鲜组织（不固定、不冷冻）切成20～400pm的厚片，以漂浮法在反应板内进行组织化学或免疫组织化学染色。因组织不冷冻，无冰晶形成也无组织抗原破坏，染色前又避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，故能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原。振动切片主要用于显示神经系统抗原分布的研究。对于柔软的胚胎脑组织，可用低熔点（45—5