盐胁迫下红花基因组DNA甲基化的MSAP分析.pdf

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盐胁迫下红花基因组谆腗治垒美蒈牙兰兰竺型竺丝竺兰李慧砹⑿,于玮玮涛林木强止現谆是发现最早,也是最主要的表观遗传修饰途径之一,其主要发生在蛄兄邪奏さ位碳原子上。在高等植物中,谆奘卧诘骺刂参锷し育、逆境耐受等方面发挥着重要作用,其调控作用主要是通过对基因表达的调控来实现。一般情况下,⑸谆牖虻某聊喙兀ゼ基化则可导致基因表达。因此,通过探究基因组内谆接肽J降谋浠山徊酱表观遗传的角度揭示基因的表达调控特征及机化,并且这种变化与盐胁迫程度相关,推测谆奘慰赡懿斡肓撕旎ǖ难涡财扔Υ稹,,—.ィ%.%.籑籗摘要:以红花幼苗为研究材料,经溶液分别处理、晕淳涡财却砦6哉,对谆浠卣鹘蠱甲基化敏感扩增多态性治觥Q∮匝±┮铮布觳獾龌蛭坏恪<谆椒治霰砻鳎珻、硌局凶芗谆史直鹞%、.%。进一步对不同处理时间红花基因组谆J降谋浠卣鹘蟹治霰砻鳎琋理驞的去甲基化模式调整占优势,而处理驞甲基化水平恢复到水平,甲基化及去甲基化模式调整基本一致。上述结果显示,盐胁迫条件下红花基因组谆刺⑸艘欢ū关键词:谆籑谎涡财龋缓旎中图分类号:;.文献标志码:文章编号:———:產·瑀甌,甌瑀瓼琱,琣篋;收稿日期:——第一作者:李慧,女,硕士,讲师,从事植物逆境分子生物学研究。猰簂..通讯作者:阎国荣,男,博士,研究员,从事植物生理生态学研究。,:.天津农学院园艺系,天津;旖蚴芯埠O亓纪踝缯旖·,,琓,修回日期:基金项目:天津市农业科技成果转化与推广项目惶旖蚺┭г嚎蒲а芯糠⒄够鸺苹.,瓽,
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材料与方法制。研究谆姆椒ㄓ泻芏啵鏒甲基化敏感扩增多态性—,治鯷、亚硫酸氢盐法及甲基化检测芯片技术等治法由于其操作简单、重复性高,已成为检测植物基因组谆胶湍J降闹匾7椒╗基于此,本试验采用分析法对红花盐胁迫前后基因组谆接肽J浇刑骄俊是菊科红花荼局参颷,是一种重要的药用植物,对治疗血淤经闭、跌打损伤、淤血肿痛等具有显著疗效,同时也是纺染工业及化妆品的重要色素原料,并且其具有较高的耐盐性。因此,从分子水平探究红花的耐盐机制不但对发现新的植物耐盐相关基因及调控途径具有重要意义,同时对红花在不同盐碱地区的种植具有重要指导作用。材料将红花种子C裎薮℃催芽处理,随后播种育苗,片真叶时,随机选取株生长旺盛的植株做为试验材料。材料处理株长有片真叶的红花幼苗分为椋蛔株·、盐处理和旎ㄓ酌缦嗤恢玫囊片,采用改良的法凶蹹提取。提取的总璕处理后,贮存于一℃冰箱备用。反应首先采用对谆敏感程度不同的同裂酶分别与工形成酶切组合对经过不同时间盐胁迫处理的红花基因组兴盖小C盖刑逑滴肛渲泻基因组蚧騇撩盖辛接缓冲液.。酶切在℃水浴中进行从崾笤诿盖胁中分别加入颍疢工接头,工接头,A用福肚撩盖辛踊撼逡海顾肚媪庸埂=油沸蛄屑。连接产物稀释倍后取盠,利用预扩引物性だ┰觥@┰龀绦蛭姹湫嫱嘶嫜由步个循环,扩增在墙小@┰鎏逑滴荓,其中含有上海生工生物工程技术服务有限公司,中国“∈~!:虷/!Tだ┮铮酆酶毡。预扩增结束后,将扩增产物稀释倍用于选择性扩增。扩增程序参照萚报道进行。扩增体系为肚渲谐含有癓稀释的预扩增产物,/·虷Ⅱ/±┮表,其他相应组分与预扩增体系相同。选择性扩增产物经红花属方法照组。虷工,肚.·玀,期李慧等:盐胁迫下红花基因组谆腗治—·。—.