淋巴细胞分离实验课件PPT.pptx

淋巴细胞分离实验
淋巴细胞分离实验
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小鼠脾脏淋巴细胞分离
目标
原理
试验步骤
注意事项
淋巴细胞分离实验
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目标
熟悉淋巴细胞和外周血单个核细胞（PBMC）分离方法
淋巴细胞分离实验
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淋巴细胞分离实验
淋巴细胞分离实验
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小鼠脾脏淋巴细胞分离
目标
原理
试验步骤
注意事项
淋巴细胞分离实验
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目标
熟悉淋巴细胞和外周血单个核细胞（PBMC）分离方法
淋巴细胞分离实验
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原 理
脾脏各种血细胞密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重细胞群按对应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
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原 理
外周血
红细胞
粒细胞
单个核细胞
血小板
淋巴细胞
单核细胞

~
~
Ficoll：±
(PBMC)

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1500rpm, 20℃ , 30min
PBMC
红细胞粒细胞
Ficoll
稀释外周血
Ficoll
稀释血浆、血小板
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试验步骤
（研磨同时滴加1640培养液，保持细胞活性）
2. 细胞混合液静置数分钟后吸管吸收，沿倾斜管壁缓缓加入淋巴细胞分层液上方（Ficoll：血细胞=1：1）
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试验步骤
，离心15min

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试验步骤
，1000 r/min离心5min ，弃上清
6. 适量培养基重悬细胞 ，计数
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注意事项
，应迟缓加，以免冲散界面
2. 吸收单个核细胞层时，应防止吸出过多上清液或分层液而造成血小板污染
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细胞计数
试验步骤
注意事项
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试验步骤
1、准备计数板：
2、制备细胞悬液：搜集细胞，制成单个细胞悬液
3、加样：用吸管轻轻吹打细胞悬液，取少许细胞悬液，在计数板上盖玻片一侧加微量细胞悬液，
4、计数：在显微镜下，用10×物镜观察计数板四角大方格中细胞数
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淋巴细胞分离实验
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试验步骤
5、计算：将结果代入下式，得出细胞密度
细胞数/毫升原液
=（4大格细胞数之和/4）×104
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注意事项
，应充分混匀细胞悬液
，也不要过少或带气泡
，数上不数下，数左不数右

，细胞数过少或过多，说明稀释不妥，需重新制备细胞悬液、计数
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试验汇报要求
原理,
步骤,
结果,
讨论。
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