淀粉酶活性测定实验报告.doc

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班级：植物092 定容〕；
⑤ NaOH
四、实验步骤

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称取2克萌发的小麦种子与研钵中，加少量石英砂，研磨至匀浆，转移到50ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，混匀后在室温下放置，每隔数分钟振荡一次，提取15-20分钟，于3500转/别离心20分钟，取上清液备用。
-淀粉酶活性的测定
① 取4支管，注明2支为对照管，另2支为测定管
② 于每管中各加酶提取液液1ml，在70℃恒温水浴中〔水浴温度的变化不应超过±℃〕准确加热15min，在此期间β-淀粉酶钝化，取出后迅速在冰浴中彻底冷却。
③ 在试管中各参加1ml柠檬酸缓冲液
④ 向两支对照管中各参加4ml NaOH，以钝化酶的活性
⑤ 将测定管和对照管置于40℃〔±℃〕恒温水浴中准确保温15min再向各管分别参加40℃下预热的淀粉溶液2ml，摇匀，立即放入40℃水浴中准确保温5min后取出，向两支测定管分别迅速参加4ml NaOH,以终止酶的活性，然后准备下步糖的测定。

取上述酶液5ml于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度〔稀释倍数视样品酶活性大小而定，一般为20倍〕。混合均匀后，取4支管，注明2支为对照管，另2支为测定管，，以下步骤重复α-淀粉酶测定的第④及第⑤的操作。
4. 麦芽糖的测定
⑴标准曲线的制作
取15ml具塞试管7支，编号，分别参加麦芽糖标准液〔1mg/ml)0、、、、、、，，摇匀后再参加3，5-二硝基水杨酸1ml，摇匀，沸水浴中准确保温5min，取出冷却，用蒸馏水稀释至15ml，摇匀后用分光光度计于520nm波长下比色，记录消光值，以消光值为纵坐标，以麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线。
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⑵样品的测定
取15ml具塞试管8支，编号，分别参加步骤2和3中各管的溶液各1ml，再参加3，5-二硝基水杨酸1ml，摇匀，沸水浴中准确煮沸5min，取出冷却，用蒸馏水稀释至15ml，摇匀后用分光光度计于520nm波长下比色，记录消光值，根据标准曲线进展结果计算。
五、数据整理及计算
麦芽糖标准液浓度mg/ml
0






OD520
工程
α(测)
α(测)
α(对)
α(对)
α+β(测)
α+β(测)
α+β(对)
α+β(对)
OD