实验淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测课件.ppt

关于实验淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
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实验目的:
-淀粉酶

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知识回顾：
1、在果汁生产中利用________，会混在产物中，可能影响产品质量。(难分离）
4、酶制剂的缺点
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1、固定化酶技术。即将酶固定在一定空间内的技术（如固定在不溶于水的载体上）。
2、固定化酶技术的优点：
（1）使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；
（2）固定在载体上的没可以被反复利用。
（二）固定化酶
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类型
优点
不足
直接使用酶
催化效率高，低耗能、低污染等
对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量
固定化酶
酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用
一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的
直接使用酶和固定化酶的优缺点
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三、 酶的固定化方法
1、物理吸附法：
将酶吸附到固体吸附剂表面的方法，固体吸附剂多为活性碳、多孔玻璃等
2、包埋法：
将酶包裹在多孔的载体中，包埋成格子型或包埋成微胶囊型
3、化学结合法：
将酶分子相互结合，或将其结合到纤维素、琼脂糖，离子交换树脂等载体上的固定方式
交联法和共价偶联法
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酶
物理吸附法
交联法
包埋法
酶的固定化方法
共价偶联法
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实验原理：本实验是用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成
淀粉
α-淀粉酶
糊精
B—淀粉酶
葡萄糖
糖化淀粉酶
麦芽糖
这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为
50~75℃；~
遇碘显蓝色
遇碘显红色
遇碘不显色
四、“α-淀粉酶固定化”实验
实验目的：1、制备固定化的α-淀粉酶
2、检测固定化α-淀粉酶的效果
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设备及用品：5ml塑料注射器 50ml烧杯 滴管 自行车用气门心及夹子 注射器架 试管及微量离心管3支
实验材料:
1、a-淀粉酶的固定化：在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。由于酶不纯，可能有些不溶物。再加入5g石英砂，不时搅拌，30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml)。用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器，流速为1ml/min。
2、可溶性淀粉溶液：取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。
3、5mmol/L KI-I2溶液：。加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中。
除去未吸附的游离淀粉酶
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反应柱
固定化酶
气门心
夹子
5ml注射器
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步骤:
,用滴管滴加淀粉溶液,.5ml流出液,加入1~2滴KI-I2溶液,.
反应柱
固定化酶
气门心
夹子
5ml注射器
淀粉
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,用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱,放置在4℃冰箱中,几天后再重复上述实验,看是否有相同的结果.
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课后练****br/>?
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可在试管中加入1ml可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。
可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉的反应中使用。
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1、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（ ）
A、温度 B、PH
C、水分