奥林巴斯IX73倒置荧光显微镜使用说明FudanUniversity.doc

奥林巴斯IX73倒置荧光显微镜使用说明FudanUniversity.doc复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室
奥林巴斯IX73倒置荧光显微镜使用说明
本内容主要分为以下几个章节:
一、明场方式的使用说明
二、相差方式的使用说明
三、微分干涉（DIC）方式的具窗口中切换相机芯片为“灰度模式”即黑白渐进按钮，此时相机自动切换为黑白芯片进行荧光图像采图；接下来勾选高级荧光模式“SFL”；
4．随后点击“实时观察”对荧光图像进行预览，将曝光模式调节为
“自动”，根据荧光表达的强弱，可以将曝光模式切换到“自动”，
通过增加曝光时间来使得荧光表达更亮，反之亦然；若调节曝光时间
超过1s，可以适当调高“增益”值(默认是1，可以调节到2)来使得
更短的曝光时间达到相同的荧光亮度；
5．如果觉得荧光样品的背景不够干净，可以执行黑平衡操作，点击
“黑平衡”后框选预览图像中荧光样品之外的背景区域，即可执行黑
平衡；
6．根据实验需求，调节拍照的分辨率后点击“拍照”即可完成对当
前预览图像的及时拍照，随后点击“图像”>“印入信息”>并选择
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“是”之后再对该图像进行保存，这样荧光图像为彩色，否则是黑白颜色的图片；图像默认保存格式为“TIF”格式。
标尺的添加
如果要在软件上显示并保存标尺信息，可在进行图像预览时点击“视图”>“标尺”，标尺就会在图像上显示出来；
随后点击“拍照”，拍照完成后，再点击“图像”>“印入信息”>并选择“是”之后再对该图像进行保存，标尺信息就会印在该图像上；
如果改变标尺格式可选“工具”>“选项”>“标尺”。
六、图片组合的使用说明
荧光图片的组合
多通道荧光自动叠加
将工具窗口切换至“流程管理”工具窗口；
选定“自动处理”选项；
单击“多通道”按钮，按钮将显示为已点击状态，此时该按钮内部的充实浅黄色的背景；
单击添加通道按钮，上下文菜单随即被打开；该上下文菜单中将
列出所有当前软件设置的观测模式（FUW、FBWA、FGW、CY5等荧光观测模式）；
5．选定首先要采集的色彩通道，例如蓝色“FUW”，随后单击第一个
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色彩通道旁边的小加号，激活当前蓝色通道，并按软件提示将滤色块
转盘转至1号位；
6．随后将工具窗口切换至“摄像控制”工具窗口，点击“实时观察”
对荧光样品进行曝光时间及增益值进行调节，达到一个最佳的观察效
果；然后切换至“流程管理”工具窗口，单击读取设置按钮，将最佳
观察效果时的曝光时间及增益值读取到当前所激活的荧光通道；
7．后面可以重复操作第4-6步，添加想要与当前已激活通道（例：
蓝色通道）组合的其他荧光通道；
8．在流程管理工具窗口中，单击开始按钮，随后软件中会提示你切
换滤色块的指令，每当你按照软件提示切换一个滤色块，相机就拍一
张荧光图像，指令提示完毕后，软件自动将不同通道下拍摄的多张荧
光图像进行荧光叠加，图像窗口中将显示所有通道的叠加荧光图像；
9．将多通道荧光图像另存为指定文件夹，默认的文件保存格式为
“TIF”格式。
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多通道荧光手动叠加
多通道图像：用黑白相机芯片所拍出的荧光图像，该图像在软件
中已默认添加并使用了相应通道的伪彩色，此时图像模式为“多通道，
位图像”。
鼠标选中任意一张多通道图像文件名后，点击图像>组合通道，组合通道对话框随即打开；
选中的多通道图像将作为第一色彩通道被自动输入到图像列表中，组合通道对话框中显示出当前色彩通道图像的预览图像；
在下一可用行中，单击图像单元格。随即会出现一个可用图像的文件名列表，表中包含所有的可用图像。此时从表格中单击选中另一可用多通道图像后，组合通道对话框中立即显示组合好的预览图像；
在列表里鼠标选中任一色彩通道图像文件名，可进行该通道色彩亮度值的调节，增加该色彩通