HIV抗体初筛试验.ppt

HIV抗体筛查试验
山西医科大学第二医院检验科 郭先锋
HIV抗体检测的目的和要点
目的
诊断 血液筛查 监测
要点
根据目的选择检测方法及检测策略
! 体的固相载体
酶标记的抗原或抗体 酶的底物 阴性对照品和阳性对照品 定性测定
标本（和结合物）的稀释液 洗涤液 酶反应终止液
ELISA检测试剂
固相载体

固相载体材质
聚苯乙烯

固相载体形状
微量滴定板
检测HIV抗体的ELISA试剂
结合物（酶标记的抗体或抗原）
辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
底物
四甲基联苯胺(TMB)
反应后显蓝色，终止后呈黄色，最适吸收波长为450nm
检测HIV抗体的ELISA试剂
洗涤液
%吐温20磷酸缓冲盐水
终止液
HRP常用强酸，最常见2mol/L硫酸
ELISA试验
标本的采取和保存
加样
孵育
洗涤
显色与终止
酶标仪测定
标本的采取和保存
避免溶血 红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记 的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色
避免污染 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应
保存 一周内 2～8℃
一周以上 - 20℃
标本送检
信息
姓 名
外螺旋盖（带胶垫）血清管
√
×
接收样本时，必须填写样本接收记录单
建立样本的唯一性编码
登记有关信息
受检者姓名、性别、年龄、职业、
送检单位、人群类别、检验结果、
送检日期、报告日期
样本的接收
样本的接收
认真核对样本与送检单提供的信息是否相符、样本有无破损和渗漏。如发现渗漏的，立即将尚存的样本移出，对样本管及包装进行消毒，同时报告主管领导和有关专家
检查样本的物理性状。并做好记录。如果样本不符合试验的要求，应将样本安全废弃，同时立即通知送样人
样本的接收
实验室工作人员在打开样本容器时，须小心，防止内容物崩溅。样本处理时，须穿戴防护衣，在生物安全柜中操作，同时应戴一次性口罩、防护眼镜，防止皮肤、粘膜污染。用后的包装要进行消毒
检测方法
必须按照试剂盒说明书（sop）中规定的要求进行操作
包括进行检测的实验条件如阳性对照和阴性对照的设置、试剂、标本加样量、孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等
标本质量
冷冻样品实验前需解冻并混匀，血清或血浆样品如溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况，可能会对试验产生影响
加样
移液器 ( 包括单头和多头移液器 ) 是实验室中重要的基本器具，一年至少校准一次
准确加到微孔板底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡，加入后及时放入孵箱
检测方法
检测方法
孵育
孵育的温度要控制好，时间要掌握好，严格按照说明书操作
注意封板，避免蒸发
反应板不宜叠放，反应板至水面下的1/3处，以保证各板的温度都能迅速平衡，保证温度的均一性
检测方法
洗涤
各种试剂盒的洗液不要混用。按要求稀释，洗液如果结晶应待其融解后配制
检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象
按孔的大小调节好洗液的量
孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好，手工洗板防止洗液在孔内形成气泡
检测方法
显色与终止
显色剂不用过期显色剂
加终止液时应避免产生气泡。如产生较多气泡，则会导致假阳性
酶标仪测定
每天（每次）
核对酶标仪滤光片波长
查洗板机管道是否通畅