植物乳杆菌培养基优化.doc

植物乳杆菌培养基的优化李达发酵剂是影响发酵产品质量的关键因素, 它的制备需要有良好的增菌培养基, 使植物乳杆菌得以大量增殖, 从而使其在经过喷雾干燥、冷冻、冻干等处理后有足够的活菌数存活。因此优化植物乳杆菌增菌培养基是一项十分重要的基础研究工作。植物乳杆菌是泡菜、发酵谷物、发酵肉制品等重要发酵剂的组成菌之一。植物乳杆菌 K2 5 分离于西藏灵菇中, 在对其进行研究时发现, 用 MR S 培养基培养该菌时, 菌落总数仅能达到 × 10 7 cfu · mL- 1左右。菌液中活菌数的增加, 可以通过培养基的优化设计来实现, 因此需要对培养基进行优化, 提高菌液中活菌数的含量。本文旨在通过对植物乳杆菌的培养基进行优化, 从而获得活菌数较高的菌液, 为研制高活力的冷冻干燥发酵剂及其产品的开发奠定基础。 1 材料与方法 试验菌种 L. plantarum K25, 分离于西藏灵菇。 材料与设备胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏为生化试剂;K 2 HPO 4、 KH 2 PO 4、 Na 2 HPO 4、 NaH 2 PO 4 和各种糖类均为分析纯。 722 型分光光度计、立式压力蒸汽灭菌器、超净工作台、分析天平、 DNG- 9240 型恒温鼓风干燥箱。 培养基及培养条件活化和计数培养采用 MRS 培养基, 蛋白胨 10g 、牛肉膏 10g、酵母膏 5g、 KH 2 PO 42g、柠檬酸三钠 2g、乙酸钠 2g、葡萄糖 20g、 Tween 801 mL 、 MgSO 4· 7H 2O g、 MnSO 4· 4H2O g, 用蒸馏水定容至 1 L,调 pH ~, 121 ℃灭菌 15min 。以 MRS 培养基为基础, 按照试验设计添加不同生长因子, 接种量 % 接入 150 mL 液体培养基中, 37℃静置培养 24h 方法 不同??、??、??的??在 MRS 液体培养基的基础?, 分?添加 2%(w/v) 乳糖、?糖、葡萄糖、?糖作为不同??; ??胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏, 分?加入 %( w/v) 作为的不同??; 分?加入 %( w/v) K 2 HPO 4、 KH 2 PO 4、 Na 2 HPO 4、 NaH 2 PO 4 作为不同??, 其?组分均?同。在培养基中接入活化后植物乳杆菌,在 37℃的条件?培养 24 h,??10 ?后,在 600 nm 条件??定菌液 OD ?,以 MR S 培养基为对照, ?较其对植物乳杆菌生长的影响??。 培养基的优化采用??试验设计优化??、??、??的用量, 因素水平?? 1 ??。其中 A 因素为?糖,B 因素为酵母膏,C 因素为 KH 2 PO 4,?定菌液 OD ?。?1 ??试验因素水平水平 Level 因素 Factor ABC 11 22 33 OD ??定用 722 型分光光度计, ?菌液?? 10 ?后, 以?同条件?的?接菌的培养基???,在 600 nm ??定菌液?光度。 菌落计数以 MRS ?体培养基为计数培养基, 采???的???数, ??于平??, 37℃培养 36~48 h 后计