第09章 高效毛细管电泳分析法9.4 高效毛细管电泳分离模式.ppt

第九章高效毛细管电泳分析法
毛细管区带电泳
毛细管凝胶电泳
胶束电动毛细管色谱
毛细管等电聚焦
毛细管等速电泳
毛细管电渗色谱
第四节高效毛细管电泳分离模式
High performance capillary electrophoresis,HPCE
Separate types of HPCE
2017/11/11
分离类型
八种分离类型,介绍常用的几种;
根据试样性质不同,采用不同的分离类型;
每种机理的选择性不同。
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毛细管区带电泳Capillary zone electrophoresis ,CZE
带电粒子的迁移速度= 电泳和电渗流速度的矢量和。
正离子:两种效应的运动方向一致,在负极最先流出。
中性粒子:无电泳现象,受电渗流影响在阳离子后流出。
阴离子:两种效应的运动方向相反;ν电渗流>ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。
最基本、应用广的分离模式。
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毛细管凝胶电泳 Capillary gel electrophoresis ,CGE
将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性,类似分子筛的作用,试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散,所得峰型尖锐,分离效率高。
蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关,CZE模式很难分离,采用CGE能获得良好分离,DAN测序的重要手段。
特点:抗对流性好,散热性好,分离度极高。
无胶筛分技术:采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。
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,其浓度达到临界浓度,形成一疏水内核、外部带负电的胶束。
胶束电动毛细管色谱( ,MEKC)Micellar ic capillary chromatography
在电场力的作用下,胶束在柱中移动。
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2. 电泳流和电渗流的方向相反,且电渗流> 电泳,负电胶束以较慢的速度向负极移动。
。
(水相)间分配,疏水性强的组分与胶束结合的较牢,流出时间长。
,扩展了高效毛细管电泳的应用范围。
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1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术。
2. 毛细管内充有两性电解质(合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物),当施加直流电压(6~8V)时,管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度。
3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关,在酸性溶液中带正电荷,反之带负电荷。在其等电点时,呈电中性,淌度为零。
毛细管等电聚焦 Capillary isoelectric focusing,CIEF
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4. 聚焦:具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移,分别到达满足其等电点pH的位置时,呈电中性,停止移动,形成窄溶质带而相互分离。
5. 阳极端装稀磷酸溶液,阴极端装稀NaOH溶液。
6. 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测。
7. 电渗流在CIEF中不利,应消除或减小。
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1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子,试样离子的淌度全部位于两者之间,并以同一速度移动。
2. 负离子分析时,前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进,逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样,阳极检测。
毛细管等速电泳 Capillary isotachophoresis ,CITP
2017/11/11
3. 不同离子的淌度不同,所形成区带的电场强度不同(ν=μE ),淌度大的离子区带电场强度小。
沿出口到进口,将不同区带依次排序1、2、3、4电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号,该区电场强度大,离子被加速,返回到“2”区;当“2”号中离子跑到“1”号区,离子被减速使之归队。
4. 特点:界面明显,富集、浓缩作用。
capillary isotachophoresis ,CITP
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