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载体硕士课程
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第一节质粒（plasmid）一．什么是质粒[质粒]染色体外能独立复制，能稳定遗传的一种环状双链DNA分子。
二．质粒的基本性质、分类和命名1．质粒的分布、大小和数目 分布：细菌、载体硕士课程
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第一节质粒（plasmid）一．什么是质粒[质粒]染色体外能独立复制，能稳定遗传的一种环状双链DNA分子。
二．质粒的基本性质、分类和命名1．质粒的分布、大小和数目 分布：细菌、酵母、霉菌和某些真核细胞 大小：106-2  810 Dalton  例子： F1： 106 ColE1:  106 R64:  106:  四环素，链霉素抗药性
数目 严紧型 松弛型拷贝数 1-2/cell >10/cell复制酶 大肠杆菌酶系 大肠杆菌酶系  F1：1-2/cell; pBR322:15-20/cell ColE1 :10-15/cell; pUC:500-700/cell
质粒的理化性质 具有一般核酸分子的理化性质质粒的生物学特性寄生性──质粒只能在宿主的细胞 内复制稳定性──每种质粒在寄生虫细胞中总有 一定的拷贝数同源性──不同质粒之间可能存在一定的 同源区。
重组性──两种不同的质粒处于同一宿主细胞 中或者一种质粒处于同一宿主中， 有可能发生质粒与质粒之间或质粒 与染色体之间的重组不相容性──有相同复制起始区的不同质粒不 能共存于同一宿主细胞传递性──有些质粒在细菌间能够传递、具有 转移性的质粒带有一套根转移有关 的基因。
消除性──存在于宿主细胞中的质粒，可用 某些办法将它除掉。复制类型──松驰型质粒的复制不受宿主 细胞蛋白质合成的严格控制。表现型──不同的质粒有不同的表型特性。
质粒的分类按表型效应分：  ①和质粒有关的性状是多方面的 ②质粒能控制宿主的遗传性状─载体 ③一种细菌可以具有不止一种表型效应 如：a．大肠杆菌的致育的因子（F） b. 大肠杆菌素因子（COlE1）
抗药性质粒（R）分解性质粒：假单孢菌中发现，如分解 樟脑的质粒特殊性质质粒：致瘤脓杆菌的质粒，寄 主植物茎部长瘤状突起隐秘性质粒：没有表型效应
pUC系列 pUC18/pUC19（） pUC118/pUC119（）一互补原理筛选用途：（1）克隆载体 蓝白筛选 (2） DNA序列分析  118/119带有M13噬菌体的DNA合成、终止包装序列带质粒菌+, 用于测序，体外诱变，链特异探针合成 （3）基因表达载体 融合蛋白
第二节噬菌体类运载体目前使用的噬菌体类运载体系主要有： 噬菌体衍生物 柯斯质粒（Cosmid） M13噬菌体 噬菌体运载体
噬菌体的基本特点：生活史DNA结构： 双链，, 线状两端带有单链12kb的互补末端，称为粘性末端 从J基因到N基因部份包含有功能不清的b2基因段以及与重组、整合和切离等溶源化有关的基因。 DNA长度不超过野生型DNA长度（）的75~105%范围进行包装
噬菌体运载体 改造野生型 DNA：突变/缺失等手段消除过多的酶切位点及