病理科优化制片及染色流程.doc

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病理科优化石蜡切片
1、切片前首先装好切片刀,把刀牢牢固定，否则,切片中就会发生许多人为现象。(最常见的人为现象是波纹,厚薄不均等）。
2、　蜡块装到切片机的蜡块夹上,夹持要平稳牢固。调整好蜡块的方位,不能偏斜,刀刃与蜡硬,或切片机主轴太向前,或切片机已磨损。
夹紧刀架，并拧紧相关螺丝,摆放切片机主轴在合适位置，找相关专业人员对切片机进行维护,调整组织脱水程序以对组织合理脱水
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切片出现裂痕
刀有缺口,石蜡内有杂质，组织内有钙化、骨片或有线结， 也可能会有棉纸纤维等
更换切片刀口,将石蜡过滤后使用,清除蜡块中的异物,对于骨或者钙化物先脱钙后再切片
切片不连片,切不下片,切片很厚，或者切片后蜡块发白,内陷
组织脱水不佳
先将蜡块溶解，取出组织,放入加热水浴的***内(80℃）,30～６0分钟,再进行透明浸蜡包埋切片
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HE染色操作常规流程
切好的片子应在6０~7０℃左右的烤箱中烘烤３0分钟以上才能进行染色。
HＥ染色手工程序:
脱蜡
１、二甲苯Ⅰ(AR) 　 　 　 　 ５分钟
２、二甲苯Ⅱ（AＲ）　 　 　 　　 　　 5分钟 　　
3、100%酒精Ⅰ（AR、无水乙醇) 　 　　 1分钟
4、100％酒精Ⅱ（ＡＲ、无水乙醇) 　　　 1分钟
5、95％酒精（工业酒精或医用酒精)　 　 1分钟
６、８０%酒精(工业酒精或医用酒精） 　 １分钟
７、自来水浸洗 　 　 　　　　 　 　 　 　　1分钟
以上3～7称为进水过程。
染色
1、苏木素染液　 　 　 　 　 　 　　 ６分钟
2、水冼 　　 　　 　　 　 　 　　　 　1分钟
3、0．５－１%盐酸酒精分化 　 　　片刻（上下三次颜色由蓝变红)
4、自来水冲冼 　　　　 　　　 　 　　　 １５分钟以上
(然后95%酒精片刻,主要是避免所带的水份稀释以下的伊红酒精,此步可免）
５、１％伊红酒精浸染 　 　　 　 　 　 1~2分钟
６、水冼 　 　 　 　 　　 　　 　 1分钟
脱水、透明、封固
９5%酒精Ⅰ 　 　 　　 　 　　　1分钟
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95%酒精Ⅱ 　 　 　 　 　　 　 　 　 　 1分钟
１00％酒精Ⅰ 　 　 　 　 　 　　 　 　　 　１分钟
１00%酒精Ⅱ 　 　 　　 　 　 　　１分钟
石炭酸二甲苯(1:3）　　 　 　 　　　 　　 　　 10秒钟
以上称为脱水。
二甲苯Ⅰ　　 透明　　　 　　 　 　 　　 　 1分钟
取出后用中性树胶(上海产,预先用二甲苯溶解,粘稠度适中即可)封固。
染色结果:
核:蓝黑色
胞浆：不同程度的粉红色
肌纤维:较深的粉红色
胶元纤维：淡红色
红细胞：桔红色。
病理染色注意事项
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1、 配制染液和其他溶液时,要根据需要和染液的保存期限决定配制数量。
２、需要保存再用的染液和试剂,必须贴上标签，注明名称、浓度、配制日期和用处等,妥善存放。经常使用的染液和试剂要经常过滤或更换新液。
3、　染色器皿须洗涤干净。必要时用酸洗液处理。将玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至1天,自来水冲洗数小时,再用洗涤剂刷洗,自来水冲洗数小时，蒸馏水冲洗后备用。(酸洗液配制：***钾3００ｇ，硫酸300ml,蒸馏水（可用自来水)3０00ml。先将***钾溶解在蒸馏水中,徐徐加入硫酸。注意:加酸时必须缓慢!并用玻璃棒不停地搅拌!)。
5、染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色(简称ＨE染色)。特殊染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。冷冻切片也用ＨE染色。少量或单个冷冻切片时手工操作比较方便。冷冻切片染染色要求在短时间(1０分钟)内完成,在保证质量的前提下!！　越快越好。
ＨE染色常见问题及优化解决方法
问题
原因
解决方法
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染色发白
二甲苯脱蜡时间不够,有蜡残留
延长脱蜡时间或更换二甲苯
染色发灰
组织固定脱水不佳或者染液配制PH不符
改进组织固定脱水程序或者改进染液配方
着色不均匀
染液太少或者分布不