荧光探针汇总.doc

1. Fluo-3 AM (钙离子荧光探针) 原理 Fluo-3 AM 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。 Fluo-3 AM 的荧光非常弱, 进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成 Fluo-3 ,从而被滞留在细胞内,和细胞内游离的钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光。生理意义细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长 506nm 发射波长 526nm (绿色) 备注推荐使用 2. Mag-fura-2 AM (钙离子荧光探针) 原理 Fura-2 AM 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。 Fura-2 AM 进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成 Fura-2 , 从而被滞留在细胞内。 Fura-2 可以和钙离子结合, 结合钙离子后在 330-350nm 激发光下可以产生较强的荧光,而在 380nm 激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用 340nm 和 380nm 这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度, 可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异, 荧光探针的渗漏,细胞厚度差异等一些误差因素。生理意义细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长为 340nm 和 380nm 发射波长 510nm (蓝色) 备注仪器滤光片不适用 3 Fluo-4 - AM (钙离子荧光探针) 原理 Fluo 4 是一种将 Fluo 3 结构中的 Cl 替换成 F 的钙荧光探针。由于将 Cl 替换成了电子吸引力更强的 F, 它的最大激发波长会向短波长处偏离 10 nm 左右。所以用氩激光器激发时, Fluo 4 的荧光强度比 Fluo 3强1倍。由于 Fluo 4 与钙离子的亲和力和 Fluo 3 近似,所以使用上和 Fluo 3 也基本相同生理意义细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长 494 nm 发射波长 516nm (绿色) 备注用激光器激发时荧光强度强,因此不推荐 4. DCFH-DA (活性氧荧光探针) 原理 DCFH-DA 本身没有荧光, 可以自由穿过细胞膜, 进入细胞内后, 被细胞内的酯酶水解生成 DCFH 。而 DCFH 不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的 DCFH 生成有荧光的 DCF 。生理意义检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度激发波长 485 nm 发射波长 520nm (绿色) 备注推荐使用 5. DHR 123 (活性氧荧光探针) 原理本身无荧光, 在超氧化酶存在时可被过氧化氢(H2O2) 氧化, 转变成发射绿色荧光的罗丹明 123 (Rhodamine 123), 因此广泛应用于检测细胞内活性氧(ROS), 如过氧化物, 次氯酸和过氧亚硝基阴离子等。生理意义检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度激发波长 507 nm 发射波长 529nm (绿色) 备注氧化后成罗丹明 123 ,荧光强度可能受到线粒体膜电位的影响 6. RhodamineI23 (线粒体膜电位荧光探针) 原理细胞膜通透的阴离子绿色荧光染料, 能够迅速被活线粒体摄取, 而无细胞毒性。生理意义标记线粒体膜电位激发波长 488 nm 发射波长 515 ~ 575 nm (绿色) 生理意义检测线粒体膜电位备注正在使用 7. Hoechst 33342