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第一节 AAV 病毒的生活周期腺病毒伴随病毒( adeno-associated virus, AAV )是微小病毒科( Parvoviridae )家族的成员之一。这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。病毒颗粒的直径在 20 ~ 26nm 之间,含有大小在 4. 7~6kb 之间的线状单链 DNA 基因组。从昆虫到人类都已分离到微小病毒。 AAV 病毒属于依赖性病毒类( De pendovirus ),最初是在纯化的腺病毒液中发现的一种污染成分( Atchinson et al. 1965 ),顾而得名。从鸟类到许多哺乳动物包括人的体内都分离到各种血清型的 AAV 病毒。大多数成年人都感染过 AAV 病毒, 但尚未发现该病毒是任何疾病的致病因素。在多数情况下, AAV 在培养的正常细胞中不发生产毒性感染,只有在有辅助病毒包括腺病毒或疱疹病毒共同感染时才发生产毒性感染( Hoggan et al. 1966; Buller et al. 1981 )。因此, AAV 病毒长期以来被认为是一种缺陷性病毒。进一步的研究发现 AAV 病毒并非缺陷性病毒, 而是在正常细胞中偏向于建立潜伏感染,仅在宿主细胞受到刺激时才被诱发进行感染性增殖。 AAV 的生活周期有两种不同的胞内期。在无辅助病毒存在时, AAV 病毒颗粒进入细胞,***壳后 AAV 的调节蛋白发生有限的表达,并抑制病毒基因的进一步表达和病毒 DNA 的复制。这种负调节作用的结果是促进病毒基因组整合到宿主的基因组中建立潜伏感染。 AAV 病毒偏向于整合到人基因组 19 号染色体 q臂的特定位置( Kotin et al. 1990,1991,1992; Samulski et al. 1993 )。研究被 AAV 病毒潜伏感染的细胞发现, AAV 对细胞表型往往有微弱影响,并影响细胞对刺激的反应能力( Yalkinoglu et al. 1988; Yakobson et al. 1987,1989; Bantel-Schaal et al. 1992, 1991 )。 AAV 生活周期的另一种胞内期是产毒性感染,往往在有辅助病毒(腺病毒或疱疹病毒)感染时发生。辅助病毒的感染可以在 AAV 感染之前、同时或之后进行。腺病毒( Ad )和单纯疱疹病毒( HSV )中与辅助功能有关的基因都已确定。腺病毒中参与提供辅助功能的基因包括 E1a, E1b, E2a, E4 和 VA RNA ( Muzyczka 1 992 ) ,但不包括与腺病毒 DNA 复制直接相关的 E2b 基因产物( DNA 聚合酶和末端酶)。1 型单纯疱疹病毒( HSV-1 )提供辅助功能的情形则有些不同, 不仅涉及与 HSV 病毒基因调节有关的基因包括 ICP0 和 ICP4 , 还需要 HSV 病毒 DNA 复制的所必需的基因产物包括 HSV 螺旋酶-引物酶复合物( UL5 , UL8 , UL52 )和主要 DNA 结合蛋白 UL29 的参与( Weindler F et al. 1991 ) 。这种在辅助功能方面的不同可能反映了腺病毒感染和疱疹病毒感染期间对宿主 DNA 合成机制的不同影响。目前的关于 AAV 工作模式有以下要点:(1) AAV 是一种生活周期以潜伏感染为主的病毒;(2 )通过潜伏感染,病毒基因