抗Her_2抗体与人_防御素_融合蛋白的表达_纯化及活性鉴定.pdf

学报
266 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2011, 42(3):266 -271
抗 Her-2抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达、
纯化及活性鉴定
1 1 1 2 3 1, 3*
袁丰瑞,张敏静, 仝雷,苏志坚,项琪,黄亚东
(暨南大学 1 医药生物技术研究开发中心;2 广东省生物工程药物重点实验室;
3基因工程药物国家工程研究中心, 广州 510632)
摘要利用小分子泛素样修饰蛋白(smallubiquitin-likemodifier, SUMO)融合表达系统, 在大肠杆菌 OrigamiB(DE3)
中表达人β防御素Ⅱ(humanβ defensin2, HBD2)与抗人表皮生长因子受体 2(Her-2)单链抗体(4D5 scFv)的融合蛋白。经
20 ℃, lmmol/LIPTG诱导 24 h后, 获得相对分子质量约为 41 kD的 SUMO-HBD2-4D5融合蛋白, 为可溶性表达, 表达量占
菌体上清总蛋白的 %。利用组氨酸亲和凝胶色谱(Ni-NTAsepharose)、特异性 SUMO蛋白酶(SUMOprotease)酶切和分
子筛(SephadexG-25)联用的方法可获得纯度大于 95%的目的蛋白 HBD2-4D5, 其最终得率达到 15 mg/L。 HBD2-4D5 200μg
对金黄色葡萄球菌(25923)和大肠杆菌 K12D31具有较明显的杀伤作用。免疫荧光分析结果显示, HBD2-4D5蛋白能
结合于 Her-2高表达的人乳腺癌细胞 SK-BR-3表面。本实验表达的 HBD2-4D5双功能蛋白具有较好的抗菌活性和特异性
结合 SK-BR-3表面 Her-2的能力, 为日后用于靶向治疗 Her-2高表达的肿瘤疾病提供研究基础。
关键词人β防御素Ⅱ;人表皮生长因子受体 2;融合蛋白;靶向作用
中图分类号 Q784;R966 文献标识码 A 文章编号 1000 -5048(2011)03 -0266 -06
Expression, purificationandactivityassayofSUMO-HBD2-4D5 fusionprotein
YUANFeng-rui1 , ZHANGMin-jing1 , TONGLei1 , SUZhi-jian2 , XIANGQi3 , HUANGYa-dong1, 3**
1 BiopharmaceuticalResearch& DevelopmentCenter;2 GuangdongProvincialKeyLaboratoryofBioengineeringMedicine;3 National
icMedicine, JinanUniversity, Guangzhou510632, China
Abstract Humanbetadefensin2 (HBD2)isasmallantimicrobialpeptide, whichisabletoinhibittheprolifer-
, HBD2 waslinkedtoasinglechainoftheHer-2 antib