小鼠骨髓 染色体的制备.ppt

实验一小鼠骨髓细胞染色体的制备和观察
医学遗传学实验
河北大学基础医学实验教学中心
小鼠骨髓染色体的制备和观察
实验目的
实验原理
仪器、材料与试剂
实验步骤
实验报告及思考题
一、实验目的
1、学会小鼠骨髓染色体的制
备方法
2、小鼠骨髓染色体的基本形态
特征和数目
二、实验原理
染色体是细胞分裂时期(体细胞的有丝分裂和生殖细胞的减数分裂)遗传物质存在的特定形式,是染色体紧密包装的结果。染色体是有机体遗传信息的载体,对染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中有十分重要的作用。
处于分裂期的细胞经秋水仙素或秋水仙***处理,由于阻断了纺锤丝微管的组装,使细胞分裂停止于中期,此时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。
本实验所用的小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色体标本。
三、仪器、材料与试剂
1、器材:光学显微镜,恒温水浴锅,冰箱,低速离心机,解剖器械(搪瓷解剖盘,探针,剪刀,镊子),脱脂棉,酒精灯,试管,试管架,磨口试剂瓶,滴管,注射器(1ml),染色缸,清洁载玻片(实验前将载玻片浸入50%酒精溶液中,置4℃冰箱中至少1h)。
2、材料:小鼠(体重20g左右)
3、试剂:%生理盐水,固定液(甲醇:冰醋酸以3:1(体积分数)配制), Giemsa染液,75%酒精,蒸馏水, %秋水仙素, KCl。
四、实验步骤
1、取材:小鼠脱颈处死。剪开腹腔,剥离后肢,由股骨关节处剪断,取下后肢。剪去骨骼外的肌肉,用棉花蘸75%的酒精来回搓,直至骨骼外再没有任何肌肉。剥离股骨,将股骨头的两段剪去少许,然后用4号针头插入骨髓腔,将股骨穿通。将带6号针头的注射器插入骨髓1/2处,%生理盐水的离心管中,操纵注射器将骨髓细胞全部冲洗到离心管中,直至骨髓腔呈白色为止。然后轻轻抽打离心管中的细胞,尽可能使其分散。
2、秋水仙素处理:将细胞悬液加入1ml 秋水仙素混匀,1000rpm,离心8-10 min,弃上清。
3、低渗处理:加入5ml在37 KCl溶液,用吸管轻轻抽打均匀。置37 OC水浴低渗处理15 min。
4、固定:低渗处理后,立即加入5ml新配制且预冷的固定液,抽打均匀,然后1000 rpm离心8 min,弃上清。
5、制备悬液:根据管底细胞的多少,-,用吸管抽打均匀,形成细胞悬液。
6、制片:将预冷的载玻片倾斜45OC,将细胞悬液从约30-50cm高处向每个载玻片上滴1-2滴。吹散,在酒精灯火焰上过几遍。