Intelectin在支气管哮喘炎症趋化因子表达中作用.pdf

华中科技大学
硕士学位论文
Intelectin在支气管哮喘炎症趋化因子表达中的作用
姓名:顾乃兵
申请学位级别:硕士
专业:内科学(呼吸系)
指导教师:甄国华;徐永健
20090501
华中科技大学硕士学位论文
Intelectin 在支气管哮喘炎症趋化因子表达中的作用

华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科
硕士研究生:顾乃兵
导师:甄国华徐永健教授
中文摘要
研究背景
哮喘是一种呼吸道常见病,以气道高反应性,粘液过度分泌,慢性嗜酸性粒细胞
炎症为特征。趋化因子在哮喘发病中的作用已经被证实,不同的炎症趋化因子在哮喘
发生的不同阶段发挥特异性的作用。根据根据靠近N末端的一个或两个半胱氨酸残基
的位置,两大家族,其来源于哮喘气道上皮细胞和肺泡巨噬
细胞。许多趋化因子,L5 , MCP-L7 , MCP-1 /CCL2 ,
MCP-L13均在哮喘气道中表达,R3受体介导嗜酸性粒细胞的聚集。在
L13在气道上皮高表达。炎症趋化因子的这种
高表达可能特异性地将嗜酸性粒细胞趋募集到气道上皮。嗜酸性粒细胞的脱颗粒将导
致气道损伤蛋白的释放。除了趋化和激活嗜酸性粒细胞外,这些趋化因子还能够影响
其他哮喘相关白细胞,例如嗜碱性粒细胞,TH2细胞等。
Intelectin 属于凝集素家族。凝集素具有广泛的生物学功能,包括细胞的分化、粘
附、凋亡、细胞与细胞之间的信号识别等。Intelectin 基因分为 Intelectin-1 和 intelectin-2,
均是在小鼠小肠的杯状细胞和 h 细胞中发现,Intelectin-1 和 Intelectin-2 有 91%
的同源性。人类基因组也有两个 Intelectin:Intelectin-1(也称为乳铁蛋白受体)是一
个分子量为 120KDa 二硫键连接的三聚体,表达于胸腺、心脏和小肠。而人类
Intelectin-2 的表达仅局限于小肠。研究表明重组的人类 Intelectin 可以结合在诺卡氏细
菌表面的呋喃半乳糖,支持了 Intelectin 在细菌的识别中可能有作用。在肠道线虫感染
后,BALB/c 小鼠肠道中 Intelectin 的表达增加,同时有肠道上皮杯状细胞的数量增加,
1
华中科技大学硕士学位论文
这提示 Intelectin 异常表达可能与肠道杯状细胞的化生和增殖有关。在哮喘患者支气管
刷片和肺泡灌洗液中也发现了 Intelectin 表达增加。在以粘液过度分泌和气道高反应性
为共同表型的 OVA、Tg-IL-13 和 IL-13/Epi 小鼠肺组织中 Intelectin 表达水平均显著增
高,进一步说明 Intelectin 可能是与哮喘发生相关的基因。为此本课题先用 Realtime PCR
和 Western-blotting 方法检测出 Intelectin 在哮喘小鼠肺组织呈过度表达,继而应用
RNA 干扰技术下调其在 IL -13 干预后的小鼠气道上皮细胞 MLE12 的表达,观察
Intelectin 基因在哮喘细胞炎症中的作用,旨在为治疗哮喘提供新的思路。本试验主要
分为两个部分:















2
华中科技大学硕士学位论文
第一部分 Intelectin 及炎症趋化因子在哮喘小鼠肺
组织中的表达

目的:观察 Intelectin 及炎症趋化因子在正常及哮喘小鼠肺组织中的表达。
方法:通过 Realtime PCR 和 Western blotting 分别检测对照(n=10)和哮喘组小鼠(n
=10)Intelectin mRNA 水平和蛋白水平的表达情况。检测哮喘小鼠第一次激发后 0h,
2h,4h,8h 和 24h 等不同时间点的 L2 L7 mRNA 的表达情况。免
疫组化和 Alcian blue 染色法检测 Intelectin 在肺组织中的定位。
结果:小鼠哮喘组肺组织 Intelectin-1 mRNA ( ± ), Intelectin-2 mRNA
(±),表达较对照组 Intelectin-1 mRNA(0±),Intelectin-2 mRNA(0±)
明显升高(P<)。Intelectin-1,Intelectin-L2 L7 mRNA 均在卵蛋白激
发后 2h 时即开始升高,24 内维持在较高水平。小鼠哮喘组 Intelectin 蛋白(±)
表达较对照组(±)明显升高(P<)。哮喘小鼠