产肠毒素大肠杆菌LTB-K99融合基因构建与表达.pdf

导师签名:穆恢时间:护占年耼日吁程剑研究生签名:呼短刽时间:妒‘年学位论文独创性声明学位论文版权授权书髓闸年《冠‘文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作魅返乃得鞑⒈硎拘灰狻研究生签名本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主一管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。
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中文摘要结果表明:表达产物较丰富,自旨口免疫的兔血清发生特异性结合,和国外研根据公布的产肠毒素大肠杆菌珽牟荒腿肠毒素堑ノ—,和ǹ乖暮苷酸序列。设计特异的引物,通过聚合酶链式反应际趵┰龅玫絃和基因。回收纯化后将蚄基因用连接酶连于克隆载体猅上,热击法转化受体菌大肠杆菌栋装呱秆⊙粜跃洌盖屑ā⒉庑颍っ髌渲泻蠰和蚱危直鹈猵—、蚿—T诖嘶∩瞎菇↙—诤匣的重组质粒狶—=ḿń峁返闹刈橹柿:驮吮泶镌靥逯柿一/分别双酶切,通过连接酶将目的基因片段克隆入表达载体中,经菌落⒅柿扩增及质粒酶切鉴定,证实融合基因己克隆到表达载体中,且具有正确的读码框和方向性,表明『饭菇薒。。利用热击法将重组质粒甃—;隑大肠杆菌中,经过诱导进行蛋白表达,。结果:扩增的蚄基因在斜榷员砻鞅J匦愿摺—诤基因全长为频计浒被嵝蛄杏个编码氨基酸,分子量大小为..>检测表明无核苷酸插入或缺失现象。经甈—检测表明,成功的构建了甃—刈橹柿#⒃诖蟪Ω司惺迪至吮泶铩究的结果一致,表达的蛋白具有特异性。关键词:;颍籏基因;融合基因—诤羡愦ǖ膄薄痮表迓产肠毒素人物杆菌
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产肠毒素性大肠杆菌鰐膨ΑM保渌恍┭刖旨于年发现大肠杆菌后,在相当长的一段时间内,大肠杆菌一直被当作肠道菌群的正常组成部分,认为是非致病菌。直到二十世纪中叶,人们才认识到~些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有致病性,尤其是对婴儿和幼畜,常导致或引起腹泻,严重的引起败血症和毒血症,甚至导致死亡。年妊芯糠⑾至四承┐蟪杆菌对猪的致病性。年,戎赋觯鹩琢浼倚蟾剐旱牟≡饕J究也证实,是引起幼畜腹泻的重要原因。的致病因子是菌毛和肠毒素。定居于小肠内,在小肠上皮细胞大量繁殖,并产生足够的肠毒素,引起腹泻。在我国,引起幼畜的腹泻占较高的比例:其中猪为%,牛为%,羊为%,患病死亡率在%一%,个别地方的比例甚至更高。在新疆,因幼畜腹泻造成的损失大约有万元,药用治疗效果不是很理想。为控制仔猪大肠杆菌性腹泻,有人采用从本场分离到的的培养物作为疫苗,即自家茁免疫妊娠母猪并收到了一定的效果,但用这种方法制备的疫苗,只能控制本场的疫病,不能为大多数养殖场采用,而且在疫病开始流行后才‘去分离⒅瞥梢呙免疫妊娠母猪,往往为时已晚。所以各国学者正积极研究粘附素抗原疫苗和基因工程疫苗。荷兰首先用基因工程方法制成了籐呙缤斗攀谐。晌J澜缟系谝桓鲇没蚬程方法制成的商品疫苗。随后加拿大也刊登了经政府批准的籏—疫苗的广告。我国相继研究出籏,,狶R籗疫苗,并投放市场。本实验目的采用基因融合的方法将菌毛抗原朊庖咦艏罫构建成重组表达载体,为研制预防仔猪腹泻的疫苗提供基础材料。产肠毒索⒊Ω司鶯—谔ㄈ4ǖ目ü唇ā磉
品9露輏驴丽簀賘雨丽隼鲇昀銎捌赡淅鯹雨孺菝面丽、产肠毒素大肠杆菌的研究进展文献综述≡土餍胁⊙原性:与细菌的运动有关。乖5鞍字剩谥虏⌒源蟪Ω司秩牖宓奶匾煨晕病原产肠毒素大肠杆菌叵,8锢际弦跣缘闹备司其抗原比较复杂,主要菌体乖⒓阅抗原、鞭毛乖⒕抗原。这些抗原中除了乖猓渌乖灰欢ㄔ谕痪晟先ú勘泶铩4送猓词故峭挚乖由于化学组成及其结构等方面的差异,导致了在免疫学方面表现出不同的抗原特异性,如此又将乖抗原和乖直鹎治H舾芍植煌难G迦海瘢讶范薊的乖种,乖