真菌感染小鼠角膜过程中菌丝和主要炎症细胞动态变化的研究.pdf

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獬簖㈣必嶝烘日期:孙年氯缛日期之卅。年∑月为日原创性声明学位论文使用授权声明或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。
中文摘要目的方法由于真菌性角膜炎的具体发病机制尚不清楚,尽管不断更新的实验室诊断方法和大量真菌性角膜炎药敏实验的资料为临床提供了相关信息,但真菌性角膜炎的临床治疗仍然靠最常见的经验进行,以致较多的患者最终丧失视力,甚至眼球的摘除。真菌性角膜炎现已成为治疗效果差、致盲率高的眼科常见病。为此,本实验建立一种模拟临床上丝状真菌感染人角膜模式的纯系小鼠真菌性角膜炎模型,裂隙灯观察真菌感染角膜后角膜组织损伤的临床表现,常规石蜡切片观察角膜组织的病理形态学改变,角膜活体共焦显微镜动态观察真菌性角膜炎动物模型影像学上的组织病理学变化,激光共聚焦扫描显微镜对真菌感染小鼠角膜过程中菌丝和主要炎症细胞的动态变化进行研究,进而推动真菌性角膜炎发病机制研究的步伐,为临床上更加积极有效地防治真菌性角膜炎提供理论和实验基础。⒍锬P徒选择国内最常见的致病菌种腐皮镰刀菌和黄曲霉菌,采用【/肯敌鼠右眼行真菌接种,左眼为手术对照组。常规消毒后眼科手术显微镜下行角膜划痕法接种真菌,深度为破坏角膜上皮到达浅基质层,对照眼同样方式划痕接种生理盐水。裂隙灯显微镜下观察角膜感染情况并拍照记录,分别于接种后第,各时相对角膜组织病变进行临床评分,同时行模型眼和对照眼角膜刮片后涂片染色和真菌培养,并对各种病原学检测结果进行对比分析。⒆橹±硌Ъ觳分别于接种后第,,魇毕嗾H⌒∈笱矍颍糜诟6砹止定9媸衅蠵染色,光学显微镜下对不同时间点角膜组织的破坏和菌丝的形态特点进行分析。⒒钐褰悄す步瓜晕⒕笛芯真菌感染小鼠模型眼和对照眼角膜早期炷:、⒅衅、后期直鹦薪悄ぶ醒敫腥厩安≡钪鼙卟康慕悄す摘要’。
结果趋势卡方检验等统计学方法分析,2钜煊型臣蒲б庖濉焦显微镜检查,对病变角膜浸润病灶的中心区及周边区选择鑫坏憬腥扫描。分别于接种后第奔涞悖孔樗婊恍∈蟪9娼悄す纹笕色镜检和真菌培养。⑷ń悄て狡唐募す夤簿劢股柘晕⒕笛芯分别于接种后第,,各时相眼球赤道穿透性切取带角膜缘的整个眼前节,于新鲜配置的褐刑蕹缒ぃ%多聚甲醛中固定的液透膜悍直鹗褂肅荧光染料、标记中性粒细胞荧光抗体、标记淋巴细胞抗体于避光孵育过夜,放射状切开平铺于载玻片上,使用溶有染料的胶水固定过夜。在激光共聚焦扫描显微镜下观察真菌的生长方式以及对真菌进行定量分析,观察真菌感染角膜过程中的炎症细胞表达的变化。⒄婢越悄ぱ琢俅苍缙谡锒系挠τ醚芯临床疑似真菌性角膜炎患者薪悄す纹袢〉慕悄す稳∥镉糜诮膜涂片镜检和真菌培养。同一病人一部分角膜刮取物均匀地涂在两张已处理过的载玻片中央,其中一张角膜涂片先行F诠饩迪鹿鄄旌笮蠧荧光染色:同一病人的另外一张角膜涂片,先行染液染色,光镜下观察后行ü馊旧ā⑼、单因素煅椤甒煅椤⒖ǚ煅椤⒛P脱劢悄す纹旧胝婢嘌两种真菌性角膜炎病变过程的早期,中期ü馊旧ǖ难粜月氏著高于F虶染色的阳性率,差异有统计学差异蹲琍;.换魄閘甈..,但与真菌培养的阳性率相比,无统计学差异∞T诓”涞暮笃冢髦旨觳榉椒ê苌能探测到真菌的存在。.·
⒄婢腥窘悄げ”涮卣两种真菌感染角膜后病变的发展过程具有一定差异,在遣”涞母叻期,后病变逐步减轻。两种真菌感染角膜后病程约,腐皮镰刀菌组病变过程相对较平稳,黄曲霉菌组病变发展快且严重。黄曲模型眼在,,时间点病变的临床评分组内比较,差异有统计学意义.∞魄咕悄炎第旒暗天临床评分明显高于腐皮镰刀菌角膜炎,差异有统计学意义。⒔悄ぷ橹±硌Ъ觳接种后第杉鄞悄ど掀げ悴糠只蛲耆彼穑彼鹈嫦赴籽重,呈水泡样变,基质水肿,两种真菌菌丝主要分布于浅、中基质层;第可见上皮缺损面积缩小,角膜基质水肿严重,基质层胶原纤维排列紊乱,菌丝分布于角膜全层,镰刀菌丝体较粗长,曲霉菌丝体短小,部分病变角膜在未穿孔前已有菌丝或孢子穿透角膜内皮进入前房;第炜杉糠中∈蠼悄ど掀げ憔限性增生修复,部分仍可见溃疡灶,基质严重