无色杆菌蛋白酶Ⅰ肽链N端作用的突变研究.pdf.pdf

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第卷第期生物化学杂志...
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无色杆菌蛋白酶肽链端作用的突变研究①
. 堡塾堡张今
,长春
李绍良、/崎山文夫
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‘日皋免谊太季蛋白质研免所
摘要无色杆菌蛋白酶。是高度专一于箱氨酸的盐
,该醇的成熟体肽链在端和端
。它们分剐具有
, 端这部分
无色杆菌出的培养液中
,属哺乳动物型丝氨酸蛋白
,包括—键,这与胰蛋白酶和其它丝
:比牛胰蛋白酶活力高倍左右;
具有较宽的最适范围.—. ;在/尿素或.%等变性剂存
在时。保留完整活性,。
利用这个酶,等把猪胰岛素链丙氨酸残基换成苏氨酸,成功地完成了人胰岛素
的半合成;等在水相向大豆蛋白质中引入了蛋氨酸,使其含量从原来的.%提高
到.%.
个氨基酸残基的成熟酶肽段,还包括端个氨基酸残基的前肽和端

,
三个分子内二硫键,分别为、
乳动物丝氨酸蛋白酶中首次见到“.’、”和构成该酶活性中心的催化三联
体.
所具有的高酶活性、高度底物专一性和高稳定性在丝氨酸蛋白酶家族中是罕见的.
阐明与这些特性相关的结构基础,对于了解酶的结构与功能之间的关系。以及对今后设计新酶

①收稿日期:——,惨回日期:—
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与其它典型丝氨酸蛋白酶的一级结构比较窖.,这种独特的结构形式可能关联于它的某
,本文设计并构建了一些突变体,分析了它们的
活性,为这方面的深入研究奠定了基础.
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叠. .


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材料与方法
. 材料
大肠杆苗,,,,,,,△/
,,,】.大肠杆菌,,,,./
,,以及,,。,/,用于表达和突变基

制性内切酶、连接酶、

核苷酸由中国科学院上海细胞研究所合成.
. 构建突变体
,含突变碱基的寡核苷酸引
物与之退火并连接,再转化到受体苗./.所得转化子的质粒需经限制性酶切图谱

这两个酶消化的—,连接后转化./细胞.