染色体上引物原位标记（PRINS）技术及其应用的新发展.pdf.pdf

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国外医学碴传学分册年第卷第期
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‘染色体上引物原位标记技术及其应用的新发展
》一弓华中农业大学‘武汉。。。靳更林李奎彭中镇综述
提要:本文详细赍拓了染色体上引物原位标记/术的新发展其中包括随机引枷原位标记技术、重
复技术、多色技求和快速技术。并对技术在研竞染色体结构、畸变、世洲拉酸蛹序和
基因定拉芋方面的应用作了介绍。
染色体上引物原位标记位标记研究。其中氚标记技术与传统
,技术是等建立技术的主要区别是掺入的标记物不同,
的分析新方法。其基本原理是:在退洗脱和检测延伸信号的方法不同。他们采用与
火的温度下,使已变性的染色体与未标记蜱寡传统氚标记原位杂交技术相似的洗脱方法,但
聚核苷酸引物特异结合,在适当豫‘条件更为严格,在洗脱掖中洗脱次,每次
,或等的催化下,以标记了分钟,这样可彻底除去游离的氚标记脱氧核苷
氧棱苷酸为底物,在合适的温度下,进行。· 酸降低本底。另外,准确掌握乳胶层的厚度也很
应,台成含有标记的链。标记了重要。结果在二价染色体上得到了明暗相间的
链通过相应的检删系统而被检测。由于一、标记信号,且信号强度明显增强地高辛配
技术有许多优点,因而在基因定位和基: ‘基标记亦得到了明显明暗相问的延伸信号,带
究中得到广泛的应用李奎等,。近年:蛭藩型与带类似“,这说明随机引物原位
技术又有了新的发展,应用日趋广泛。标记技术是研究鱼类染色体结构的有效方法。
一
、
.随机引物原位标记技术反应所产生的信号较弱。这一不足
随机引物原位标记阻碍了该技术在实践中的应用。受技术的
技术是等,: 启示,等提出了重复引物原位
技术发展而来,其与传统标记—技术,其依据是当
术的主要区别在于:该技术所采用的引物蹩￡反应被莺复进行不大约次时,新
特异的,可在目的序列不清楚的情况下对舆邑台成的标记会很好的保留在合成位点周
体进行研究。等用该技术围,而不扩散】。据此可重复进行反应,
人类淋巴细胞的絷色体进行研究,结果得薯熹识标记以达到提高信号强度的目
均匀标记的染色体,标记带与阳性带致的。
应,着丝点区域来被标记。等等用重复技术对
用该技术对人类羊膜细胞和淋巴细胞进行了: 人号染色体上的一卫星进行了研究。
较研究,发现两种细胞的号,号,号和他们选择人与鼠杂交所产生的杂交细胞只古
一聚色体的异染色质区墨现出不同的带。号染色体作为研究材料,引物、分别

进行了随机引物原值氚和地高辛配基标记一· 家自然科学基盘和武汉市青年晨光计蜘的研究内容
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与染色体链的Ⅱ一卫星序列中保守序列互荧光原位杂交技术要考虑各杂交探针融解温度
补,,他们研究了双引物对实验结果的影响,发的不同,为了平衡这个差异,反应的严谨
现反应中同时加入引物和,反应度就会受到影响。
次,比只加引物或,
次所得到的倍约强倍,比进行传统反技术的一个重要优势就是快。近年
应,但反应时间与前面次反应的时间相同所来为了适应临