非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其衣壳蛋白P72的原核表达分析.pdf

宁夏大学
硕士学位论文
非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其衣壳蛋白
P72的原核表达
姓名:李维彬
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:王玉炯;蒋正军
20060401
摘要关键词:非洲猪瘟病毒,,一是非洲猪瘟病毒实时荧光定鼙觳夥椒ǖ慕ⅲ憾欠侵拗瘟病毒农壳蛋白谌顺Ω司械谋泶铩V饕J匝楹徒峁鏔:=⒁恢挚烀浴⒆既贰⑻匾斓腁考觳夥椒ǎ軹秸胗ü舛糠治鲈理,借助计算机辅助,对基因序列进行分析并利软件对检测引物和探针进行了优化筛选;利籶质粒作为参比模扳对从Φ耐嘶鹞露取⒚纠胱印⒁铩探针浓度等参数进行了优化并对本方法的灵敏度、特异性、定鼙线性荚系、精确度等进行了评估,同时通过对田间样品的检测对本方法的检测效果进行检验,建立了实时荧光定量测方法。经优化,荧光从χ型嘶鹞露取秸牒鸵锏淖罴雅ǘ确直鹞。/疞和疞,最低检出茧为隹奖词闹柿#匾煨晕%.值的痠ァ6运图斓葜砣庋方屑觳猓峁R跣浴I鲜鼋峁砻鳎⒌氖凳庇ü舛觳夥椒芄豢焖佟⒆既贰⑻匾臁⒘槊舻囟訟病毒核酸进行定量分析,、更为可靠的检测方法。肞技术,从舍非洲猪瘟病毒虻目寺≈柿欣┰=≈猎靥錺邢嘤ξ坏闵希⒆;了拗骶鶥中,。重组菌株璉导后,,结果表明衣壳蛋白蚩梢栽谑体茁中高效表达。达到了菌体总蛋白的%,表达产物的分子量约为,并能被抗体所识别。疿
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沁啪峭中英文缩写词表英文缩写词英文全名中文全名非洲猪瘟病毒序列相似性分析壕碱墓对牛血清白蛋白循环阈值脱氧核糖核酸三磷酸腺甙溴化乙啶乙二胺四乙酸荧光能量共振传递然ü馑异丙基硫代—
湘:刳撕彤时间:洲年/月独创性声明时间:≯一年厂月年时间:关于论文使用受权的说明本人完全了解宁夏大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得宁夏大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意宁夏大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名
第一章引言侵拗砦良捌湮:侵拗砦敛《狙芯非洲猪瘟。是由带洲猪瘟病毒珹引起的猪的一种急性,高度接触性传染病,其士要症状是高热、皮肤发绀、淋巴结和内脏器官的严重出血。急性病例的死亡率接近啊非洲野猪、钝缘蝉属笛节肢动物及耐过家猪是的携带者和传染源”.。该病丁二年首先往东非发现保婧笤诜侵奕糠值厍加泄貌》⑸谋ǖ馈D壳埃貌×餍卸∪龆〉杭其邻近撒哈拉沙漠地区的部分非洲国家,在欧洲的葡萄牙、西班牙、意大利等国及其美国南部等屡有发生,由于研急型、慢性病例的存住,给该病的诊断带来一定的困难,使得该病有不断蔓延的趋势,给养猪业带来了很大的损失。而且该病也成为猪病研究的一大难题。流行病学研究表明,胛轆的国家主要是给猪饲喂了被污染的进口饲料而引起的【俊S捎贏的高致死性和高度传染性,目前又无有效的疫苗,所以对待姆秸肜词茄细竦募觳楹痛笈涝祝鉴于我国是养猪大国,该病一旦传入我国,其后果不堪设想。所以我国必须建立一套安全可行的检测方法。非洲猪瘟的病原体一非洲猪瘟病毒,是一种大的、具囊膜的双链《荆貌毒是年国际病毒分类委员会执委会会议新命名的非洲猪瘟病毒科的唯一成员,也是唯一的虫媒《尽病毒基因组全长为,中央有笥业谋J厍蕉宋?杀淝W蠖嗽右端约,含有末端反转重复序列,这些重复序列的增加或者缺失是造成不同分离株基因组长度差异豹主要原因U庵只蚰谥馗葱蛄杏肽承┘纳娴摹Q棠弧笨乖衔O嗨疲赡苡敫貌毒的免疫遥避机制有关电镜观察结果和蛄蟹治霰砻鳎瓵哂薪橛诙徊《颈页埃翰什《局涞奶卣鳎>哂虮彩病毒的外形、痘病毒的内涵”。病毒颗粒含有寅径为一的核心,核心的外周是直径为的二十面体农壳及源于胞浆膜的含脂类的囊膜,共有个壳粒。病毒的这些形态与虹彩病毒相似M徊《疽谎《净蜃榱蕉硕加刹煌耆ヅ涞募罨宰槌傻姆夹环而相