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第卷分析化学仪器装置与实验拽术, 第期
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毛细管无胶筛分电泳涂渍柱的制备和性能考察
郭栩褚新华戴鹏林炳承陈理
中国科事院太连化学物理究所,
摘要对用于毛细管无脏筛分电泳的聚丙烯酰胺柱的材料、瀑如荆和工艺进行了一系列的
优化,.ב/,迁移时间的
小于. ; , 范围为.~ .。
关键词售内壁修饰,..,肽·瞪氧棱糖棱酸片段.’嚣、:‘、≥一
前言’~ 一⋯~
在高效毛细管电泳中,分离环境的核心部件是融溶百英毛细管柱,这种材料用于电
泳过程会产生两种现象:一是电渗;二是吸附。电渗问题限制了分离模式和条件的选择,也
给稳定凝胶毛细管造成了困难,而大分子样品与管内壁的硅羟基所发生的不可逆吸附,则会使
样品的回收率降低,难定量,还会造成基线不稳,使各次操作的迁移时间难以重复,严重地影
响定性的准确性。最终还将极大地影响柱子的使用寿命。可见消除毛细管对样品的吸附是非
常重要的。在毛细管无胶筛分电泳系统中,尽管影响分离的主要因素在于筛分系统本身,但我
们的实验结果表明,拄壁的处理及处理效果对片段分离的结果也不可忽视。
目前,管壁涂渍是消除吸附的重要途径之一,它包括静态涂渍和动态涂渍两种,而动态涂
渍较为常用,我们实验室在这两方面都进行过尝试。。比较现有的各种方法,本文采用聚
丙烯酰胺作为改性物质,聚雨烯酰胺是一种亲水性聚合物,由于其生物相溶性较好,目前经常
一
被用来作拄壁改性物质。文献中也采用过聚雨烯酰胺柱涂渍的方法,但未做较为系统的研
究。在本文中,我们采用聚丙烯酰胺对毛细管拄内表面进行涂渍处理,同时对偶联试剂等因素
作了较为深入的探讨,并用肽、核酸和多胺等样品考察其性能。
实验部分
. 材料和主要仪器设备
石英毛细管柱. ,.河北永年光导纤维厂;毛细管电泳仪一型
美国伯乐公司;毛细管电泳仪美国伯乐公司。
. 主要试剂
丙烯酰胺电泳纯—;过硫酸铵电泳纯—;四甲基乙
二胺电泳纯—;一甲基丙烯酸丙酯基三甲氧基硅烷;氯
基丙基三乙氧基硅烷一化学纯,辽宁盖县化工厂;二甲基亚砜分析纯,北京化工厂;
一一收璃接受.
车盘摹国寡自然科学基盘资助项目。
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分析化学第卷
棱酸样品碱基对种片段购自上侮华美公司;激素肽样品由美国伯乐公司提
供“,多胺样品;腐胺.,精胺.,糖脒.∞,硫酸奎宁购自—
公司;甲基纤维素, 英国进口。
. 毛细管柱涂渍
毛细管柱预处理:取一段毛细管柱,分别用/、、/、
依次冲洗,在气相邑谱炉中通氮气,℃干燥;通入偶联试剂溶液,两端胶封,在
气相炉中℃恒温反应一段时间后,用甲醇冲洗,水冲洗;配制~ 丙烯酰胺溶液,加
入定量的和,在℃恒温反应.,放置~ 至完全聚合,水冲洗,氮气吹
干,炉中老化。
结果与讨论
一般认为,大分子在毛细管壁的活性吸附点是管壁的硅羟基,因此文中我们以一定条件下
的电渗数值作指标,考察硅羟基被覆盖的程度。。
电渗测量是在相应条件