水稻原生质体培养再生植株程序化的初步研究.pdf.pdf

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第耶卷第期实验生物学报
年月
水稻原生质体培养再生植株程序化的初步研究
澳
中国科学院上海植物生理研究所, ; //’/,/,
植物原生质体作为遗传操作的理想受体, —,矮龙晴、苏御糯选、迟红糯、、
对于细胞杂交, 基因导入以及创造新种质或改垂红糯、单鉴,脑脂糯。
良农作物品种均有很大潜力。近十年来, 禾成熟种子去壳经常规消毒,接种到不同浓度,
的固体培养基上,即./
谷类作物原生质体培养研究已取得了不少进
/, . /, ./。, .
展,但培养技术尚待完善。水稻原生质体培
/,暗培养。月后计算愈伤组织的
养仍存在植板率低和重复洼差等同题,影响了
诱导频直,再继代培养于各自相同的培养基上。取第
研究的进一步开展。于年首先注意次继代的和。培养基上部分愈伤组织转接
到禾本科植物建立胚性缅胞系用以制备原生质到培养基上。在继代培养第次时观察不同处理
体进行培养的重要性, 对此巳从不少的例证中愈伤组织的鲴胞状态。
得到证实。然而如何提高胚性细胞系的得率,胚性量浑幕的矗立和原生嗣体的游离

和缩短建立优质胚性细胞系的时间就成为进一选取培养基上的第次继代,生长快、结构
步提高并赶上模式植物的关键步骤。八十年代紧密的愈伤组织—, 置于三角瓶中, 加
国际上在原生质体培养研究中提出了要探索总一培养基表。于/的水平旋
转摇床上,在散射光下悬浮培养℃,,每
结“困难植物原生质体培养的经验, 进一步提
周更换一次新鲜培养基。
高并找出规律使整个过程“程序化
或系统化”;侧如使重衰游离原生质体的一液组分

要农作物或经济植物的原生质体培养达到模式
植物如烟草的水平,使一个品种或一个种的
经验能扩展到与它相近的品种或种】。对此已
开展了不少工作,但是针对水稻原生质体培养
的程序化研究报道甚少。本试验通过调节培养
基中, 含量,观察对水稻愈伤组织的发生
.“微孔滤膜过滤灭菌。
和生长状态与细胞类型的变化,并对快速建立.
胚性细胞系和由胚性细胞系分离原生质体以及
原生质体培养、分化等方面进行比较观察, 为经过个月培养,将—胚性细胞系, 放八
深入开展水稻原生质体培养的程序化研究打下酶液中表于一/, ℃恒温摇
了基础。
本文年月日收到。年月日
挞演与贡法接受
国家自然科学基金重点攻关项目。工作中得到
一
、材料王辅德、叶瓤丰先生热心指导, 江苏省农业科学院太
参试水稻品种为、太湖糯, 台北,丙湖地区农科所提供种子,谨此致谢
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床上酶解—,然后用目镍丝网过滤。滤液用
/离心盥收集原生质体, 并用等渗
洗次,再用原生质体培养基洗一次备用。
三原生质体培养和愈侑组织分化
将游离洗涤好的原生质体重新悬浮于改良的群三商
培养基中,密度调整至一/,在直径为
培养皿中加。原生质体悬浮液,并采用荧光
。—
素双醋酸酯染色法, 进行括力测定。培养天———————————
后,用荧光增白剂染色观察细胞壁, 检查原生质体的. . . .
细胞壁再生率】。分别于培养天和天统原计生质置不同浓度,对种子诱