简析小类泛素化修饰过程中主要酶蛋白的表达纯化和抗体制备.pdf

南开大学
硕士学位论文
小类泛素化修饰过程中主要酶蛋白的表达纯化和抗体制备
姓名:王远根
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:王颖
20090601
摘要是近年发现的能,如细胞内定位、稳定性及与其它生物大分子的相互作用等。化修饰偶联酶、连接酶等。为研究化修饰酶的表达及化所制备的抗、和的多克隆抗体为研究化修饰酶的表小类泛素化修饰蛋白类泛素修饰蛋白,可通过异肽键共价连接到靶蛋白上,影响靶蛋白的生物学功是一个动态可逆的过程。参与化修饰的酶主要包括:活化酶、修饰的调节,本文分别对活化酶的两个亚基和以及偶联酶进行了表达纯化,并制备了多克隆抗体,主要研究结果如下:;蟪Ω司渲衟甴泶颱鞍椎位氨基酸。在浓度为/嫦掠盏际奔湮跫拢琔大量表达;在浓度为跫拢琔罅勘泶铩T诖嘶础上,利用亲和层析的方法分别纯化了变性的秃头潜湫缘腢利用本室保存的蛋白和本文纯化的蚒鞍鬃魑?乖分别免疫新西兰兔,制成多克隆抗体。免疫印迹实验表明,抗、和的多克隆抗体能够识别原核来源的抗原,具有较高的灵敏度和较好的特异性。抗抗体还能识别原核表达的全长蛋白。此外,本文制成的抗、和的多克隆抗体能够检测真核细胞内源表达的,和蛋白。本文所纯化的蚒鞍祝捎糜谔逋釹奘畏从Γ达及化修饰的调节积累了材料。关键词:表达纯化多克隆抗体
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第一章引言第一节小类泛素化修饰蛋白与类泛素化修饰真核基因表达在转录、翻译及翻译后修饰水平上受到严密调控。蛋白质翻化、乙酰化、***化、糖基化、泛素化等。世纪年代中期,人们发现了一种新的修饰形式—泛素化修饰,泛素是一种高度保守的含个氨基酸的多接到靶蛋白的赖氨酸残基侧链上,形成异肽键。泛素化修饰的一个主要功能是中发现了一种新的蛋白质一,这是关于的最早报道【。年,人的环⑾是由多个成员组成的蛋白质家族,在进化中高度保守,广泛存在于原生动物、后生动物、植物和真菌中。在低等真核生物中缃湍负凸只有鯯嗦牖颍恢参锟梢员泶种;哺乳动物中含有諷的第諷肿。其中,.蚐氨基酸序列非常接近,具译后修饰是真核基因表达有效且重要的调控形式之一,修饰方式主要包括磷酸肽,通过泛素激活酶、泛素结合酶及泛素连接酶的依次催化共价连引导被修饰蛋白进入鞍酌柑宓贾掳械鞍椎慕到狻=昀矗致叫⑾至几种与泛素蛋白结构类似的蛋白质,如小类泛素修饰蛋白、虺芅、虯等,它们的结构与修饰方式和泛素类似,也能够通过异肽键与靶蛋白结合,完成对靶蛋白的修饰,但生理功能却要比泛素丰富,