H19对孤雌胚胎干细胞多能性的作用探究.pdf

南开大学
硕士学位论文
H19对孤雌胚胎干细胞多能性的作用研究
姓名:尹宇
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:刘林
2012-05
摘要胚胎干细胞具有多能性而且具有无限增殖能力和分化潜能。人的胚胎干细胞对于治疗退化性病变有很大帮助。但是人的胚胎干细胞研究充满了伦理道德方面的问题。孤雌胚胎干细胞是~种从激活的卵子中分离出来的多能性干细胞,没有破坏自然存在的胚胎,因而避免了很多伦理道德上的问题。孤雌胚胎以及孤雌胚胎干细胞没有发育上的全能性是因为它们的基因印迹不正常。且桓鲈胚胎发育过程中以及干细胞分化过程中高表达的印迹基因。谋泶锸艿酱τ其基因上游的印迹调控区的控制。虻墓δ苣壳盎共皇呛芮宄基因敲除的小鼠是存活并可育的。而且如果在孤雌胚胎中敲除了麓品⒂氖间能够进行的更长。更重要的是,如果结合了核移植技术以及蚯贸就能得到没有精子参与其发育过程的小鼠,而且这种小鼠还能够正常繁殖后代。因此锌赡茉诠麓婆咛ヒ约肮麓婆咛ジ上赴行惺棺乓欢üδ堋我们首先比较了孤雌胚胎干细胞与正常受精胚胎干细胞中谋泶锴榭觯诠麓婆咛ジ上赴械谋泶镆8咭恍=酉吕次颐窃擞肦干扰技术在孤雌胚胎干细胞中对泶锝懈扇拧T谖颐堑氖笛橹校档虷表达并不影响孤雌胚胎干细胞的多能性以及自我更新的能力。我们又在体内和体外实验中对孤雌胚胎干细胞进行了分化。在体外分化实验中,降低泶锖螅赴谐现心肌样跳动的比例增加,而且跳动频率也加快了,这与检测心肌相关基因表达上调的结果是相一致的。同时我们也发现体外实验中降低泶锬芄皇沟向表皮分化增加。体内的分化实验结果中,扇诺南赴纬傻幕チ鲆1日常的大。所以降低泶镉欣诠麓婆咛ジ上赴谔迥谝约疤逋獾姆只关键字:孤雌胚胎干细胞,印迹基因,只
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⒌囊庖胚胎干细胞是从着床前囊胚分离得到的一类多能性干细胞,具有无限增殖和多向分化潜能,在发育生物学、基因的发现和功能研究以及组织工程学领域具有重要的科学意义和应用价值。小鼠细胞的成功分离拉开了胚胎干细胞研究的序幕,,人的细胞系也已经成功分离S捎贓赴茉谔逋獯罅吭鲋常夷茉谔囟ㄌ跫路只晌8髦掷嘈偷细胞,所以人的细胞在一些疾病的治疗中被寄予厚望,例如帕金森症,阿尔茨然症以及糖尿病等,。但是,由于细胞的分离需要用到早期胚胎,来源受到限制,而分离过程会破坏原有胚胎,所以人的细胞的研究面临着很大伦理道德上的挑战,这也给细胞的临床应用带来很大阻力。而临床应用上的大量需求以及伦理道德障碍之间的矛盾推动了近些年:来诱导型多能性干细胞的发展】。虽然赴某鱿忠欢程度上解决了从胚胎分离细胞的伦理道德问题以及体细胞核移植的低效问题,但目前对于赴闹乇喑袒粕形赐耆私馇宄盏夹噬写τ诮系水平,而且由于其在诱导过程中通过不同方法加入了诱导因子,而这些操作过程可能会对细胞造成额外影响,这些细胞在使用过程中的安全性是否可靠尚无定论,想从赴猩秆〕霭踩ǘ志哂薪虾枚嗄埽缘南赴彩潜冉暇哂刑粽性的,以上种种问题都一定程度上限制了赴诹俅采系脑擞谩孤雌胚胎干细胞来源于激活的卵子,不需要破坏天然的胚胎,而且由于高等哺乳动物孤雌发育胚胎正常情况下没有发育上的全能性,不具有自然发育为完整生命个体的能力,所以避免了很多细胞研究和应用中的伦理冲突A硗猓捎趐细胞可以来源于与病人自身,可以避免或者大大降低免疫排斥等问题,因此人的赴有临床治疗的巨大潜能。琲琾珽
.,在未受精蛭薷副纠丛匆糯镏什斡条件下单性的分裂发育9麓粕吃诘偷榷镏斜冉铣<诓溉槎镏腥春苌偌2溉动物的卵母细胞被阻滞在减数分裂期,直到精子进入或者人工进行的孤雌激活。孤雌激活通过运用物理和化学方法,模拟精子激活卵子的过程,使得处期的卵母细胞开始分裂并进入胚胎发育阶段。赴谴诱庵滞ü孤雌激活方法得到的胚胎中分离出来。目前赴丫有∈蟆⑷说榷嘀治种中分离得。虽然孤雌胚胎不具备发育上的全能性,但是赴淳有细胞的各种特性。由于在孤雌激活过程中抑制了第二极体的排出,所以也呈现正常的二倍体核型。赴胝5腅赴芾嗨疲硐殖鲆幌盗蠩细胞的特性,比如:高核质比,清晰的核仁,表达龋、菶细胞的分子标记,而且也能够长期传代而保持不分化状态,在体内和体外的分化实验中都能形成三个胚层组织,这些都说明赴隕赴谎哂凶晕更新和分化的多潜能性。另外,在实验中发现孤雌胚胎与正常受精胚胎相比,藕磐吩銮慷鳰藕磐芳跞酰饪赡苁莗细胞更容易建系的原,与细胞相比,赴嗽诼桌淼赖路矫婧兔庖吲懦夥矫嬗杏攀