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细胞培养
PBS配方
PBS即磷酸盐缓冲生理盐水,都是含有H2PO4-、HPO42- 缓冲体系和NaCl,用于调节渗透压,达到与人体相当的水平,分为含钾离子和不含钾离子两种。
1、不含钾离子的PBS配方(由NaCl,Na2HPO4和NaH2PO4三种成分组成,用于其它实验缓冲和稀释用)
母液的配制:
Na2HPO4:称取 Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水
NaH2PO4:称取 NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=)的配制:
先配 PB (pH=,100ml):取19ml NaH2PO4, 81ml 的 Na2HPO4,即可。
PB (pH=)按相应比例适当稀释即可,如:
PB(PH=) :取 500ml PB,加水稀释至 1000ml 即可。
PB (PH=):取50ml PB,加水稀释至 1000ml 即可。
PB (PH=):取100ml M PB,加水稀释至 1000ml 即可。
配好后加入 NaCl %(g/100ml)即可。
* 其他各种另 PH值的 PB(100ml)配方:
pH NaH2PO4(ml) Na2HPO4(ml)

92 8
90 10

85 15






51 49
45 55
38 62
33 67
28 72
23 77
19 81
16 84
13 87


7 93

  .
2、含钾离子的PBS配方(由NaCl,KCl,Na2HPO4和KH2PO4四种成分组成,一般用于组织培养)
(PBS)配制方法:(免疫组化常用)
称取8g NaCl、 KCl、 Na2HPO4、 KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,,最后加蒸馏水定容至1L即可,高压灭菌。
需要注意的是,,而非Na离子或k离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。
常用PBS:NaCl— ,NaH2PO4·2H2O— ,Na2HPO4·12H2O— ,800ml三蒸水搅拌,无需调PH,1L定容。
DMEM培养基:DMEM干粉溶入800ml三蒸水中, NaHCO3,~,最终用1000ml容量瓶定容,无菌层流间中过滤分装。
1640培养基:1640干粉溶入800ml三蒸水中, NaHCO3,~,最终用1000ml容量瓶定容,无菌层流间中过滤分装。
胰酶:%~%,通常是用生理盐水或PBS等平衡盐溶液作为溶剂。
胰酶(含EDTA):%~%的EDTA
细胞冻存液:多数细胞配方为10%DMSO+20%血清+70%细胞培养基,也有介绍直接10%DMSO加90%含血清培养液,部分细胞需10%DMSO+90%血清。理论上血清越多冻存效果越好。
谷氨酰***:标准的谷氨酰***100×液为200mmol/L()。通常培养液中浓度为1~4mmol/L(~),4oC下半衰期为7天,两周以上需要重新加入。
双抗:青霉素——100IU/ml(通常培养液中终浓度为20~100IU/ml均可),链霉素——100ug/ml(通常培养液中浓度为50ug/ml)。多数体外培养都是使用青霉素和链霉素,上述的工作浓度可在37oC长时间控制轻度污染而对细胞无毒性作用。
MTT:,溶于无酚红的培养基中(就用培养细胞的培养基),浓度为5mg/ml,过滤除菌,4℃避光保存。在配制和保存的过程中,容器最好用黑纸包住。保质期为两周。
台盼蓝染色液:称取2g台盼蓝,加入少量双蒸水研磨粉碎后,加水至50ml