不同饲养层对牛胚胎干细胞培养效果的影响研究.pdf

论文题目研究生:指导教师:业:研究方向:院:二。一二年五月专学分类号学校代码鱼密级编号学号
学位论文作者签名:蹲指导教师签名:二主尘閖罕学位论文作者签名:丛垫蹲指导教师签名:二赵.。争期:鲨迹骸唬豪家期:逝期:兰正≥左,,原创性声明在学期间研究成果使用承诺书互乡日期:河唬得内墓直太堂及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做本人声明:所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除本文已经注明引用的内容外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:内蒙古大学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘,允许编入有关数据库进行检索,也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权,作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果,须征得内蒙古大学就读期间导师的同意;若用于发表论文,版权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。日
不同饲养层对牛胚胎干细胞培养效果的影响摘要虽然围绕牛胚胎干细胞建系已进行了大量的研究,但迄今为止仍未建立适合牛胚胎干细胞的环境条件。探索一种适合其生长的饲养层保持未分化状态,对保证干细胞的全能性具有重要意义。本实验采用两种不同饲养层培养的牛胚胎干细胞,采用形态学鉴定、免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色、拟胚体形成、、腞检测等方法对牛胚胎干细胞进行检测;进一步通过实时荧光定量方法检测以小鼠胎儿成纤维细胞作为饲养层培养的不同代次牛胚胎干细胞标志基因、、泶锊钜欤⒂肓街炙茄闩嘌的同一代次牛胚胎干细胞多潜能特征基因、、表达量进行了比较,以求探索一种新的更适合牛胚胎干细胞生长的饲养层,为最终建立牛胚胎干细胞系提供实验依据。状尾捎靡孕∈筇ザ上宋赴屯吹呐Lザ上宋赴按一定比例种瞥傻幕旌纤茄闩嘌E咛ジ上赴=峁允生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞比单独生长在小鼠或牛胎儿成纤维细胞饲养层的结构致密、与滋养层界限明显;小鼠和牛胎儿成纤维细胞在比例混合饲养层培养条件下牛胚胎干细胞克隆结构致密、显著堆积且边缘轮廓清晰,优于其它比例组合;获得的牛胚胎干细胞旧ḿ癘、一乖泶锞裳粜裕直鹪谔逋夥只培养形成了拟胚体。结果表明小鼠和牛胎儿成纤维细胞在以比例混合下制成的饲养层能更好的支持牛胚胎干细胞的体外生长,得到的内蒙古大学硕士学位论文
克隆形态最好。捎霉苛衙顾卮聿煌ǘ鹊腟小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐鸟苯苷亚系细胞魑K茄闩嘌E咛ジ细胞,为牛胚胎干细胞培养体系的建立提供实验依据。用、、痬苛衙顾胤直鸫.、的赴随着传代次数的增加形态学观察赴け浠⒍陨ぴ以赴魑K茄愕呐E咛ジ上赴蠴和一疫组化检测、碱性磷酸酶染色、体外分化形成拟胚体等实验。结果显示当丝裂霉素的浓度为痬捎行У囊种葡赴裂;赴—代作为饲养层细胞形态最好且获得的牛胚胎干细胞旧ḿ癘抗原表达均成阳性,且在体外培养可形成拟胚体。结果证明使用国产丝裂霉素能有效的处理细胞且在以赴魑K茄闩嘌呐E咛ジ上赴芎芎玫谋持其未分化状态。觳馀E咛ジ上赴亩嗲蹦芴卣骰蛞籓一表达情况,以此找到影响牛胚胎干细胞生长的主要原因。通过觳庖訫为饲养层生长的第降代牛胚胎干细胞多潜能特征基因和相关因子表达差异,结果发现生长在以魑饲养层上的牛胚胎干细胞随着传代的增加、、三者表达量明显减少,导致牛胚胎干细胞自身维持多能性能力降低且促进相关分化基因的表达,这是以魑K茄闩嗯E咛ジ上赴无法持续传代的根本原因。以两种新的饲养层即牛和小鼠胎儿成纤维、、,
混合饲养层和赴嘌牡谖宕E咛ジ上赴蠷检测多潜能特征基因和相关因子表达。结果表明生长在混合饲养层和赴魑K茄闵系呐E咛ジ上赴腛、的表达量相比于魑K茄慊竦玫母上赴胁煌潭鹊奶高,说明混合饲养层:和赴茄阍诘骺嘏E咛ジ上赴自我更新和分化过程等方面优于茄悖徊街っ髁嘶旌纤养层和赴魑K茄愀屎吓E咛ジ上赴呐嘌关键词:牛胚胎干细胞、饲养层、标志基因、实时荧光定量内蒙古大学硕士学位论文
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目录摘要⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..螩第一部分实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..牧稀主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯.⋯实验试剂及耗材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..』⋯⋯⋯⋯..培养液⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.笛榉椒ā