CEA试剂盒使用方法.doc

CEA试剂盒使用方法
人癌胚抗原(CEA)ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人癌胚抗原(CEA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人癌胚抗原(CEA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计
算样品浓度。
上海裕平生物科技公司,高品质ELISA试剂盒供应商,品质卓越,价格实惠,
售后完善。欢迎垂询:021-60545848
手机:**********-********** 提供免费代检测服务。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内***的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集
血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避
免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会
有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后的样本无需稀释,直接
取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:2400、1200、600、300、150、75 pg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19
份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,
在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回
4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.
待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体
100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60m