姚敏杰基于磁性微粒和荧光微球的dna检测方法研究(西北大学硕士学位答辩)2007.6.ppt

基于磁性微粒和荧光微球的DNA
检测方法研究
答辩人:姚敏杰
专业:分子微生物学
导师:陈超教授
崔亚丽教授
西北大学生命科学学院
2007-05
西北大学硕士学位论文答辩
目录
综述
研究报告
实验一基于磁性微粒的DNA杂交检测
实验二荧光微球用于人乳头瘤病毒的基
因分型研究
全文总结
目前现有的固相核酸杂交检测方法
杂交基本原理
本研究的意义
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综述
特异性、敏感性、样品制备和标记繁琐、仪器的研制和机械化程度不高
大规模、高通量
快速、自动化程度高
DNA芯片技术
敏感性较低
特异性好
bDNA技术
工作量大,实际应用受到限制
假阳性率较低
差异杂交
灵敏度低,操作繁琐复杂
特异性强
印迹杂交
不能鉴定所测基因的相对分子质量,而且特异性较差,有一定比例的假阳性。
操作简单,事先无需对核酸样品进行特殊处理,一张膜可同时检测多个样品
斑点杂交/狭线杂交
组织原位杂交
操作繁琐,费时耗力
特异性高,可精确定位
菌落原位杂交
原位杂交
缺点
优点
方法种类
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磁性微粒技术
磁性微粒的研究始于上世纪70年代,它除具有纳米颗粒的特征外,还可以通过表面的功能基团进行修饰,共价偶联蛋白、核酸等有机/生物分子, 并且具有顺磁性,可在外加磁场的作用下快速移动和分离而广泛应用于免疫学检测、靶向载药、细胞分选、酶的固定化以及分子生物学(DNA和RNA的测序与纯化)等领域中。
技术优势
灵敏度高、特异性强
实用性、操作性强
仪器设备简单、省时省力
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荧光微球技术
液态悬浮芯片技术是指一项将核苷酸、抗原、抗体、受体、肽链及酶底物等生物大分子结合在荧光微球表面,根据生物测定的原理,与待测样品中的相应物质发生特异性反应,然后借助流式细胞仪对检测结果进行实时定量化分析的技术。
技术优势
高通量、快速分析
高特异性、高精确性、高灵敏度
省时、省力、经济
液态悬浮基因芯片仪器照片
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固相直接杂交检测原理示意图
RNA
DNA
后续检测
后续检测
标记检测探针
固相基质
固相基质
标记物
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单碱基链延伸反应检测SNP基因型的示意图
5’
3’
+
5’
3’
后续检测
分别代表不同的碱基
标记物
图解
单碱基链延伸反应的原理
引物
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本研究的意义
有助于建立经济、快速的DNA固相检测方法
有助于高通量、高灵敏度、高特异性和自动化的DNA
检测方法的建立
有助于对遗传疾病、肿瘤、传染病等的迅速诊断,有
助于司法部门对罪犯的鉴别、性别鉴别、器官或组织
移植的配型等领域的研究与应用
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实验一
基于磁性微粒的DNA杂交检测
实验原理
探针与磁性微粒的偶联
靶片段的扩增
单碱基链延伸
荧光信号的引入以及结果的读取
实验小结
研究报告
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检测原理示意图
实验原理
A:jingwen Chen 等检测SNP原理示意图[1]
B:本研究设计原理示意图
[1] jing wen Chen, Marie A. lannone et al. A Microsphere-Based Assay for Multiplexed Single Nucleotide Polymorphism Analysis Using Single Base Chain Extension [J].Genome ,10:549-557
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