实验一 平板菌落计数.doc

实验一平板菌落计数
一、实验目的
学****平板菌落计数的基本原理和方法。
二、实验原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可来自样品中的2~3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素的影响,但是,由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息,所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂),以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
三、实验器材
,中性植酸酶产生菌菌悬液。
,植酸酶产生菌筛选培养基。
:移液器,无菌平皿,恒温培养箱等。
四、实验步骤

取无菌ependorf 管7个,分别用记号笔标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6,10-7向每个ependorf 管移取900μL无菌水。

用l00μL移液器分别吸取l00μL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液和中性植酸酶产生菌菌悬液(待测样品),精确地放至10-1的ependorf 管中,此即为10倍稀释。将10-1ependorf 管上下颠倒,使菌液充分混匀。另l00μL移液器吸取10-1菌液l00μL,精确地放10-2ependorf 管中,此即为100倍稀释。……其余依次类推。
放菌液时吸管尖不要碰到液