磁珠提取DNA原理.pdf

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磁珠纯化DNA原理之邯郸勺丸创作
时间:二O二一年七月二十九日

分选磁珠的作用原理是基于一种固相载体可逆化固定(SPRI)
:磁珠、DNA、聚乙二醇(PEG)、
以及盐离子等,在一定浓度的PEG和盐离子环境中,DNA可吸附到羧
基修饰的高份子磁珠概略(即固相载体),该过程是可逆的,在适当
条件下,结合的DNA份子可以被洗脱回收.
纳米级此外磁珠概略性质不合,别离原理也不尽相同,但基本上
固态的球状资料组成并没有太大差别,基础结构一般分为3层,最
内层的核心是聚苯乙烯、第二层包裹磁性物质——四氧化三铁
(Fe3O4),最外层概略是羧基(-COOH)修饰的高份子资料所组成,
其中羧基行使与核酸结合的任务.
在整个别系中,PEG是影响DNA回收的决定性因素(其他因素还
包含DNA大小和浓度、盐离子浓度、孵育时间等等).DNA在一定
浓度的PEG存在条件下,NaCl或MgCl2促进条件下,使DNA产生脱
水反响,份子构象会产生急剧变更,由线状被压缩形成卷曲球状,继
而聚集沉淀,同时随PEG份子量、浓度以及盐浓度的不合,不合长度
,特定份子量的PEG
的功效主要是与盐离子配合作用,改动不合长度DNA的份子构象,
同时增加体系的粘稠程度,使磁珠存在其中处于悬浮状态,不容易
时间:二O二一年七月二十九日
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沉降,增加磁珠在空间位置的碰撞与排斥,从而增加核酸与磁珠的
聚集效率与效果,除此之外,PEG与蛋白质具有相容性,也可去除样
品中的蛋白
质.
当处于PEG和盐离子环境中的DNA,因脱水作用而产生份子构象
改动后,会流露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团,与概略
带负电荷的羧基磁珠结合,但如何解释负负电荷之间的作用,目前
,这是由于带正电荷的盐离子的作用(如
Na+).带负电的磷酸基团借由解离的盐离子(如Na+)与羧基形成
离子桥,
之后,加入水性份子,会快速充分水化DNA,解除其三之间的离子者
相互作用,使得吸附到磁珠的DNA被纯化出来.
磁珠的出现,使得核酸制备的实验可以实现自动化,同时相较于
传统的回收方法,还具有3个明显的优势:1)效率更高,以DNA为
例,1μL磁珠的承载量可达7μg;2)避免使用有机溶剂,如酚类、
时间:二O二一年七月二十九日
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***仿等等,加倍平安;3)操纵简单,无需离心,也更有利于保存核酸
的完整性.

蛋白酶K具有降解蛋白的功效,而细胞膜主要是由蛋白质组成的富
有弹性的半透性膜,因此蛋白酶K能够裂解细胞,从而DNA能够释放
出来.

用无水乙醇沉淀DNA,
醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反
响,对DNA很平安,,乙醇会夺
去DNA周围的水份子,使DNA失水而易于聚合.

采取Tris-HCl(pKa=)的缓冲系统,由于缓冲液是TrisH+/Tris,
不存在金属离子的搅扰作用,故在提取或保管DNA时,大都采取
Tris-HCl系统,并且TE缓冲液中的EDTA更能稳定DNA的活性.
***仿抽提DNA时,还要加少量的异戊酵?
在抽提DNA时,为了混合均匀,必须剧烈振荡容器数次,这时在混合
液内易产生气泡,
低份子概略张力,
有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白相以及下层有机
溶剂相维持稳定.
时间:二O二一年七月二十九日
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