自身抗体检测项目及临床意义.doc

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抗核抗体(antinuclearantibodies,ANA)泛指抗各种核成分的抗体,是一种广泛存
在的自己抗体。ANA的性质主若是IgG,也有IgM和IgA,甚至IgD和IgE。ANA可以
与不一样本源的细胞核起反响,无器官特异性和种属特异性。ANA主要存在于血清中,也可
存在于其余体液如滑膜液、胸水和尿液中。
ANA在SIE患者的滴度较高,但也出此刻其余好多自己免疫病中,在好多研究报告中,
都将检出ANA作为自己免疫甚至自己免疫病存在的依照。这种现象的体系还没有了然,有待
于进一步研究。
(一)ANA的种类及意义
因为细胞核成分的复杂性,不一样成分的抗原性也不一样;所以就会有多种不一样的ANA。
(DNP)由DNA和组蛋白构成。因为DNP抗原存在不
溶性和可溶性两个部分,可分别产生相应的抗体。不溶性DNP抗体平时不完整被DNA和
组蛋白所汲取,它是形成狼疮细胞的因子;可溶性抗原存在于各种关节炎病人的滑膜液中,
其相应抗体也出现于RA病人的滑膜液中。
:①抗天然DNA(nDNA)抗体,或称抗双链DNA
(dsDNA)抗体;②抗变性DNA抗体,或称抗单链DNA(ssDNA)抗体。抗dsDNA抗
体对SLE有较高的特异性,70%~90%的活动期SLE病人该抗体阳性,效价较高,并与病
情相关。抗ssDNA抗体可见于多种疾病中,特异性较差。
(ENA)多从动物的胸腺中提取。先将胸腺匀浆并破
碎细胞,分别出细胞核;再经盐水或磷酸盐缓冲液办理后,很简单从胞核中提拿出来。ENA
不含DNA,对核糖核酸酶敏感。最近几年来的研究表示,ENA可分为十几种,现仅介绍几种主
要的ENA及其相应抗体。
(1)抗

PNP

抗体:

PNA

即核糖核蛋白,对核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感,加热

561h
变性。抗

PNP

抗体常见于混杂性结缔组织病。高效价的抗

PNP

抗体对混杂性结缔组织病
有诊断意义,
而低效价的抗

PNP

抗体可在

SIE患者中发现。
2)抗Sm抗体:该抗体在一名Smith姓的患者血中初次发现,便以其名字的前两个字母命名。Sm抗原系非核酸性糖蛋白,对DNase及RNase均不敏感,但经碘酸盐及胰蛋
白酶办理后可被水解。抗

Sm

抗体是

SLE的特异性标记之一,但阳性率偏低,约为

30%~
4%;可能是

SIE的一种回忆性抗体,故在非活动期亦可检出。若将抗

dsDNA

和抗

Sm

抗
体同时检测,可提升SLE的诊断率。
(3)抗SS-A抗体:SS-A为干燥综合征(SS)的A抗原,可从动物胸腺的胞浆中提
取。抗SS-A抗体主要见于SS,但也可见于其余自己免疫病如SLE中。
4)抗SS-B抗体:SS-B为SS的B抗原,亦可从动物胸腺或小鼠肝细胞浆中提取,
可被胰蛋白酶、轻度加热或改变溶液pH而破坏。13%的SLE及30%的SS患者有抗SS-B
抗体。
5)抗组蛋白抗体(AHA):组蛋白是一种碱性蛋白质,含有大批的赖氨酸及精氨酸。
目前已经发现组蛋白抗原可分为5个亚单位:H-1、H2A、H-2B、H-3、H-4。抗组蛋白抗体及其抗亚单位抗体见于SLE及药物引发的LE。SLE病人血清中的抗组蛋白亚单位抗体检
出率序次为:抗H-2B、抗H-1、抗H-3、抗H-2A及抗H-4,以抗H-2B和抗H-1为主,并与SLE的活动性相关。
(二)ANA的检测方法
因为ANA的复杂性及多样性,故测定方法众多。目前ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。
。多用小鼠肝切片或
印片作为细胞核基质,结果比较稳固靠谱,在荧光显微镜下见到的细胞核有荧光着色为阳性
反响。如将患者血清先进行不一样比率的稀释,可以做大体的定量试验,在
1:80稀释依旧虽
阳性时,对SLE的诊断有较大的参照价值。在油镜下观察结果,可以将
ANA阳性的荧光现
象分成
4种主要的荧光核型,核型的确定对临床诊断有进一步的参照价值。①周边型表示
抗DNA
抗体存在;②均质型表示有抗
DNP抗体;③斑点(颗粒)型多为抗
ENA抗体;④
核仁型多为抗核小体抗体。SLE患者常出现周边型、
匀质型或混杂型,斑点型常见于混杂结
缔组织病,而硬皮病多为核仁型;周边型对
SLE有较高的特异性。
最近几年有人用锥虫或血鞭毛虫(比方绿蝇短膜虫试验)作基质测定抗
dsDNA
抗体,因为这些
血寄生虫的动基体内含大批的纯
dsNDA,无其余抗原搅乱;在阳性结果时,可见鞭毛一端
的动基体显示清楚的荧光。所以该试验用于测定抗
dsDNA抗体拥有特异性强和敏感性高的
长处。其余,短膜虫对人畜无害,可以人工养殖,本源方便,值得推行。

DNA抗体,有Farr法及过滤法。①Farr法的原理为用同位
素标记DNA,被标记的DNA
和被检血清的抗DNA抗体结合,经50%硫酸铵饱和液积淀,
而后比较积淀物和上清液中的放射活性,从而得出
DNA结合活性,一般结合率大于
20%
为阳性。②过滤法是在分别结合物时用纤维素酯薄膜滤器(孔径为
)进行过滤,游
离的DNA被滤去而与抗体结合的复合物被阻留在滤膜上。
,其重复性及敏感性均较
对流免疫电泳及双扩散为高。目前已有试剂盒供应。
(immunoblotting)先将混杂抗原作凝胶电泳,分别开不一样的区带,然
将这些带转印到***纤维素膜上,最后用酸标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和解析。
因为该试验不需纯化的单个抗原,可在同一固相上作多项解析检测,矫捷度高,特异性强。
故目前已广泛用于自己免疫病患者血清中多种自己抗体的检测,如检测抗Sm抗体、抗RNP
抗体、抗SS-A抗体及SS-B抗体等。
其余,还可用传统的琼脂双向扩散法、对流免疫电泳法、间接血凝法和补体结合试验等。
这些试验要求的实验条件比较低,但敏感性也比较低。
二、类风湿因子
类风湿因子(RF)是抗变性IgG的自己抗体,主要为19S的IgM,也可见7S的IgG
及IgA。它能与人或动物的变性IgG结合,而不与正常IgG发生凝集反响。RF主要出此刻
类风湿性关节炎患者,约70%~90%的血清中和约60%的滑漠液中可检出IgG类RF,这
很可能是自己IgG变性所引起的一种自己免疫应答的表现。
IgG是感染等原由引诱的免疫应答中的骨干抗体,这些抗体与相应抗原结合时会发生变
性;其余,在炎症等病理条件下滑漠或其余部位可能产生不正常的IgG;这些变性IgG就
构成自己抗原,刺激免疫系统产生各种抗IgG抗体。滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结
合而形成中等大小的免疫复合物,比血清中的IgM类RF更拥有致病意义,因为这一类免
疫复合物易于堆积在关节滑膜等部位,可激活补体,形成慢性渐进性免疫炎症性伤害。
RF的检测最初是用致敏绵羊红细胞凝集试验(Rose-Waaler法)进行检测,目前最常
采纳IgG吸附的胶乳颗粒凝集试验;但此法的矫捷度和特异性均不高,并且只好检出血清
中的IgM类RF。IgG类和IgA类RF则需要用RIA或ELISA等方法检测。
RF在类风湿性关节炎患者中的检出率很高,RF阳性支持初期RA的偏向性诊断,如对
年轻女性应进行RA微风湿热间的鉴别;而对非活动期RA的诊断,需参照病史。但RF也
象ANA相同,其实不是RA特有的特异性抗体。在SLE病人均有50%RF阳性,在其余结缔
组织病如SS、硬皮病、慢性活动性肝炎及老年人中均可有不一样程度的阳性率。
三、其余自己抗体
(一)抗甲状腺球蛋白及微粒体抗体
这种抗体可以针对甲状腺的多种成分,以甲状腺球蛋白和微粒体为代表。抗体主若是
IgG,可以介导ADCC活性,引起慢性淋巴细胞性甲状腺炎,又称乔本(Hashimoto)甲
状腺炎。检测方法多用免疫荧光技术,以甲状腺组织的冰冻切片作基质。也可用RIA、ESISA
等方法进行检查。强阳性反响或高滴度抗体对乔本甲状腺炎和原发性甲状腺功能减退症有诊
断意义,抗体变化对于疾病治疗转归的议论甚为重要,对乔本甲状腺炎与甲状腺功能亢进的
鉴别诊断也有较大价值。正常人血清中极少检出甲状腺抗体,或仅有5%~10%无疾病症状
人群有低度反响;女性和年龄较大的人群检出率较高。检出该抗体可提示既往患过自己病,
也可能是自己免疫病的初期指标。
在甲状腺功能亢进(Graves病)患者的血清中存在甲状腺刺激抗体(TSAb),包含长效甲
状腺刺激素(LATS)和LATS者(LATS-P)。这些抗体作用于甲状腺细胞表面的TSH受体,使
受体活化并促进甲状腺素的开释;过多的甲状腺素引起机体的代谢亢进。
(二)抗乙酰胆碱受体抗体
抗乙酰胆碱受体(AchR)抗体可结合到横纹肌细胞的乙酰胆碱受体上,引起运动终板
的破坏,使神经-肌肉之间的信号传导发生阻碍,以致骨髓肌运动无力,称为重症肌无力
myastherniagravis,MG)。疾病可发于任何年龄,最初出现的症状常是眼肌无力,从而累及其余部位,常呈进行性加重。
抗AchR抗体多用较敏感的方法进行检测。①ELISA法:以α-银环蛇***包被酶标板,
并与骨骼肌匀浆(含AchR)作用,再加入待测血清和比较血清,最后加酶标抗体。试验的
正常结果为阴性或≤。②放免法:将放射性同位素标记的α-银环蛇***与骨骼
匀浆结合,再加入患者血清和抗人IgG使之积淀,检测积淀物的放射性。
抗AchR抗体的检测对MG拥有诊断意义,且特异性和敏感性较高,大体90%的MG
患者阳性;伴有眼肌症状的病人,抗体效价低于一般症状的病人;同时还用来监测对该疾病
免疫克制治疗的成效。肌萎缩侧索硬化症患者用蛇毒治疗后可出现假阳性。
(三)抗光滑肌抗体
抗光滑肌抗体(ASMA)产活力制不明,但与肝和胆管的自己免疫疾病相关,特别是慢
性活动性肝炎(狼疮性肝炎)和原发性胆汁性肝硬化(PBC)。该类疾病的发生与自己免疫
性亲近相关,试验结果有助于诊断以及与其余肝病的鉴别诊断。
ASMA的检测用间接免疫荧光法,用大鼠胃大弯或小弯的冰冻切片作基质;正常结果
为阴性或≤1:20。检出阳性率较高的疾病有慢性活动性肝炎和PBC;而在肝外性胆汁堵塞、
药物引发性肝病、急性病毒性肝炎及肝细胞癌等时ASMA的检出率极低。
(四)抗心肌抗体
在心肌受损(比方手术、感染或拥塞等)时,心肌细胞内的物质释出,作为隐蔽抗原刺
激机体产生抗体。这些抗体与心脏结合可以致新的免疫性伤害,比方心包切开综合征、风湿
性心脏病等。
抗心肌抗体的检测用胎儿或大鼠心肌的冰冻切片作抗原基质,进行免疫荧光检测,正常
值为阴性。阳性结果相关的疾病有:心脏术后综合征、心肌拥塞后综合征微风湿性心脏病等。
(五)抗线粒体抗体(AMA)检测
抗线粒体抗体(AMA)所针对的抗原是内层线粒体膜,无器官特异性和种属特异性。
该抗体主若是IgG,与PBC相关,但对肝细胞或胆管没有直接的伤害效应,在疾病中的作
用尚不明确。
AMA用免疫荧光法进行检测,用大鼠肾的冰冻切片作基质;也可用补体结合试验来检
测。正常结果为阴性或效价在1:5以下。PBC患者可有79%~94%为阳性反响或效价≥1:160;
长远连续性肝堵塞、慢性活动性肝炎;、原由不明性肝硬化等也可呈阳性反响。但是肝外性
黄疸为阴性。
(六)抗胃壁细胞抗体
抗胃壁细胞抗体(APA)可以破坏胃粘膜的壁细胞,使内因子产生阻碍,有时也可发现
抗内因子抗体而使其功能受阻,从而以致恶性贫血的发生。患者可无前驱症状或患有胃炎。
APA常以间接免疫荧光法检测,用人或家兔的胃冰冻切片作抗原基质,正常***为阴
性反响,正常少儿可有2%~20%的检出率。恶性贫血患者能检出抗胃壁细胞或抗内因子抗
体。而其余各种贫血患者不可以检出此中任何一种抗体。胃溃疡或胃癌等极少该抗体阳性。
(七)抗胰岛素抗体
抗胰岛素抗体在体内可与胰岛素结合形成抗原抗体复合物,使胰岛素的活性明显降低甚
至无效;从而以致胰岛素依赖性糖尿病,必要注入大批胰岛素才能有疗效。该抗体主要为IgG,
其余4类Ig也存在;此中IgE类抗体可引起病人的变应性反响,IgM类可能引起胰岛素耐
受。
检测抗胰岛素抗体及其免疫球蛋白种类可用各种琼脂扩散试验、间接血凝和ELISA等
方法,试验结果会有助于糖尿病的分型诊断及合适治疗。其余,还可用于监测病人的胰岛素
耐量。
(八)抗肾小球基底膜抗体
抗肾小球基底膜(GBM)抗体多产生在链球菌感染后,为共同抗原交织引诱产生。抗
GBM抗体可引起GBM伤害,以致肾小球肾炎的发生。
抗GBM抗体的检测也是用荧光或酶免疫组化法,用动物或人的肾组织冰冻切片作抗原
基质。阳性反响可见与肾小球血管走行相一致的荧光染色或酶底物染色;这与免疫复合物时
斑块状分布的染色现象完整不一样。试验正常值为阴性。该试验主要用于肾小球肾炎的分型诊
断与鉴别诊断。约5%的肾小球肾炎由抗GBM抗体引起,为自己免疫性。
(九)抗精子抗体
正常状况下精巧胞是隐蔽抗原,但当外伤、手术或感染时,精子可与免疫系统接触,诱
导机体产生抗精子抗体。高滴度的抗精子抗体可使精巧胞的活力降落甚至数目减少,是以致
男子不育症的原由之一。在部分女性也可检出抗精子抗体,可能与不孕症相关。
抗精子抗体的检测方法好多,比方精子制动试验、精子凝集试验、免疫荧光法、ELISA
法和免疫珠结合法等。抗精子抗体阳性相关的疾病有实验性输精管堵塞和输精管切断等,一
部分妇女和孕妇也可检出抗精子抗体。
(十)抗血细胞抗体
抗红细胞抗体主要涉及ABO的Rh血型抗体及自己免疫性抗体,与输血、重生儿溶血
症和自己免疫性溶血性贫血等相关。抗血小板和抗白细胞抗体等均与自己免疫性血液病相关。
四、其余免疫学检测
(一)淋巴细胞检测
固然自己免疫病多与自己抗体相关,但仍有部分疾病不存在相关的自己抗体,而与致敏
淋巴细胞相关,还可能与免疫调理异常或其余要素相关。这些相关要素的检测对疾病的诊断
有必定的参照意义。
、外周神经炎及实验性变态反响性脑脊髓炎等
疾病,可能与自己反响性致敏淋巴细胞相关。固然这些淋巴细胞在疾病中的确切作用要比自
身抗体的作用更难证明,但相关性自己也拥有必定参照价值。检测致敏淋巴细胞可用器官特
异性抗原作引诱剂,进行淋巴细胞转变试验或吞噬细胞挪动克制试验等;皮肤试验也能反响
机体致敏状况,但有诱以致敏性或引发变态反响的危险。实验结果需结合临床或其余检查进
行综合解析。
,所以进行淋巴细胞数目及亚群比
例的检查也有必定意义。检测内容包含淋巴细胞总数、T和B细胞分类计数及CD4/CD8亚
群比率测定等。
(二)狼疮细胞试验
狼疮(LE)细胞是胞浆内含有大块状聚合DNA的中性粒细胞。狼疮病人血清中的抗核
抗体可引诱LE细胞的形成,所以称为LE因子。用病人血清与正常人中性粒细胞一起培育,
可使后者变为LE细胞。该试验称为狼疮细胞试验,试验过程更要3天连续重复进行。
系统性红斑狼疮病人有75%~80%呈阳性。在RA、硬皮病、部分肝炎、结节性动脉
炎、多发性硬化症、皮肌炎和变态反响病等有时可呈阳性反响。现已证明最少有十几种药物
可引发LE细胞试验阳性。