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微生物论文01939微生物学大实验
牛奶和苹果中***菌的分离纯化及生物学性状观察
课程名称:微生物
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实验操作日期:
前言
水果的主要成分是碳水化合物和水,特别是水的含量比较高,适应于微生物的生长繁殖。水果中含有碳水化合物、蛋白质、无机酸、维生素、有机酸和大量的水分(85%以上),其PH一般偏向酸性(—)这些条件都很适合微生物的生长繁殖。这些微生物大部分是嗜酸性微生物即霉菌、酵母菌和某些细菌[1]。
乳及乳制品中细菌通常检出率最高,其对乳及乳制品的作用也非常复杂。牛奶的营养成分比较完全,都含有丰富的蛋白质,极易吸收的钙和完全的维生素等。因此牛奶是微生物的良好培养基[2]。
1 实验材料与仪器设备

变质鲜奶、变质苹果

量筒搪瓷缸移液管希尔球试管培养皿酒精灯接种针玻璃棒涂布棒显微镜电子天平锥形瓶

结晶紫碘液 95%乙醇番红美蓝乳酸酚蒸馏水生理盐水香柏油
营养琼脂粉土豆麦芽浸粉葡萄糖琼脂
2 实验方法
培养基配制
细菌:营养琼脂培养基
,加入100ml蒸馏水,加热,煮沸,溶解,121℃高压灭菌20min
酵母菌:麦汁培养基
称取10g麦芽浸粉,于100ml蒸馏水中,溶解,煮沸121℃,高压灭菌20min
霉菌:土豆培养基
取200g土豆切成1cm左右的小块,加1000ml蒸馏水煮沸10min,过滤,补充水分,分装100ml。加入2g葡萄糖,2g琼脂,溶解,121℃高压灭菌20min

取试管分别装入9ml的蒸馏水,塞好试管塞,与移液管,涂布棒,一起放入灭菌锅中高压蒸汽灭菌
[3]


取1ml牛奶于9ml无菌水中,溶解稀释。取稀释液1ml于9ml无菌水中,继续溶解稀释,即菌液为10-2的稀释度。

取1g苹果,溶解在9ml的无菌水中,倒入培养基中,增殖培养。28℃培养箱中培养2—3天。

细菌:划线
营养琼脂倒入培养皿中,静止一段时间后,培养基凝固。取接种针,酒精灯上灭菌,三区划线。划线后,在37℃培养箱中培养24小时。
酵母菌:涂布
麦汁培养基倒入培养皿后,静止,凝固。酒精灯附近,无菌条件下,涂布棒蘸取菌液(菌液中酵母菌含量少,不需稀释,直接涂布),均匀涂布在培养基上,28℃培养箱中培养2—3天。
霉菌:点植
土豆培养基倒入培养皿后,静止,凝固。接种针,酒精灯灭菌,在腐烂苹果表面取霉菌,点植在培养皿中。28℃培养箱中培养三天以上。


外形与细菌菌落极为相似,但比细菌菌落大而突起,一般大2-3倍。光滑、湿润、表面粘稠,奶油状。稍透明,不结合,易挑起,质地均匀正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一[4]。
酵母菌菌落(土豆培养基中间部分)
酵母菌的制片
载玻片上滴生理盐水,接种环灭菌,取样,均匀涂在载玻片上,酒精灯加热固定,滴一滴美兰,缓冲水冲洗,高倍镜下观察。
染色后的酵母菌
:(此次实验因为时间原因没有做)
1)子囊孢子的培养方法: