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苯酚降解菌的分离鉴定及其活性、耐受度的测定
罗容(2220**********)邓晓霜(2220**********) 李玉(2220**********) 10级生科五班
2012/6/9

摘要:
苯酚是一种严重污染物,目前的化学降解方法存在众多弊端,生物处理方法越来越受到重视。从崇得湖畔的淤泥样品中分离,得到能够降解苯酚的苯酚降解菌,经富集培养,平板涂布之后,挑出些许菌落划线得单菌落,再进行分离培养,再用得到的苯酚降解菌进行耐受度和活性的测定。
苯酚降解菌的分离鉴定及其活性、耐受度的测定
摘要:苯酚是一种严重污染物,目前的化学降解方法存在众多弊端,生物处理方法越来越受到重视。从崇得湖畔的淤泥样品中分离,得到能够降解苯酚的苯酚降解菌,经富集培养,平板涂布之后,挑出些许菌落划线得单菌落,再进行分离培养,再用得到的苯酚降解菌进行耐受度和活性的测定。
关键词:苯酚降解菌、富集、分离、耐受度、活性
正文:

从崇德湖中采取的污泥样品
富集培养基:; K2HPO4 ; MgSO4 ; pH7. 2~7. 4; 115 􀀁灭菌30 min.
分离培养基:(NH4) 2SO4 为1; K2HPO4 ; ; pH7. 2 ~7. 4; 115 度灭菌30 min.
苯酚溶液:400、500、600、700、800、900mg/L各200ml。
1000、1300、1600、1900mg/L的苯酚溶液各10ml


取1g污泥溶于99ml无菌水,充分搅拌,使其溶解。然后再取1ml菌悬液与富集培养基中培养3~4天。待菌长出后,,如此连续五次,培养基中的苯酚浓度随着转接次数逐渐增加(200,300,400,500,600,800mg/L),以获得降解能力较强的菌株。,3~4天后去观察,数出菌落数。

挑出长势较好的菌落进行划线分离培养,得到单菌落。将得到的单菌落进行革兰氏染色。并在显微镜下观察。再挑取得到的单菌落配置成菌悬液,进行平板涂布。3~4天后来观察。数出菌落数,并观察菌落的形态。
(紫外分光光度法)
:400、500、600、700、800、900mg/L6个浓度梯度的苯酚溶液中培养48h,用分光光度计测出苯酚含量。本实验使用紫外光分光光度计,苯酚在270nm处有最大吸收峰,故测定苯酚在270nm波长下的吸收值。
标准液:200、400、600、800mg/L
标液吸收值分别为:、、、
待测样品吸收值(400、500、600、700、800、900mg/L)分别为:
、、、、、
作出标准曲线,查出待测样品中苯酚浓度,计算各浓度下苯酚的消耗量,再根据平板计数得出的菌体数计算其降解活性。公式为(配制苯酚液浓度-测得苯酚液浓度)X配置体积/平板菌落数;
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