高效液相色谱.doc

高效液相色谱
1). 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。
2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3). 打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。
4). 进入HPLC控制界面主菜单,进入手动菜单。
5). 有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6). 调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。选用合适的流速,走基线,观察基线的情况。
7). 设计走样方法。若需建立一个新的方法,选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。一个完整的走样方法需要包括:
,一般2-5分钟;
;
;
,随不同的样品而不同。
8). 进样和进样后操作。进样时所有的样品均需过滤。方法走完后,记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
9). 关机时,先关计算机,再关液相色谱。
注意事项:
1). 流动相均需色谱纯度,水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2). 柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。
3). 所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4). 压力不能太大,最好不要超过2000 psi
HPLC的两个使用问题
HPLC的两个使用问题
1. 色谱柱中的流动相会排干吗?
不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形:不慎未及时补充流动相,泵将溶剂瓶中的流动相吸干了,HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱?泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了?色谱柱还能使用吗?事实上,如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干,并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气,泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体,而不能输送空气。
相比之下,另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样,整个色谱柱干涸的情况不太容易发生,多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了,因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了,也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂(如经氦气脱气的甲醇)冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面;已脱气的
溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要(以1mL/min的流速)冲一个小时或更多的时间被彻底浸润,恢复到正常状态。
2. 使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接头需要注意什么问题?
如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱,使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。PEEK管路容易连接;PEEK接头不仅无需工具,手拧即可固定,而且容易调节锥箍之外的管路长度,方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是:PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象,但PEEK遇到上述溶剂会变脆。另一个需要考虑的因素是压力限。不锈钢管可耐受6000帕斯的压力,但PEEK管只能耐受近4000帕斯(但多数HPLC应用系统压力不会超过3000帕斯)。
使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能,因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管,因而压力太高时,可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。
使用HypersilTM GOLD色谱柱能够得到优异的色谱峰形。因为采用高纯硅胶,Hypersil GOLD色谱柱能提供非常对称的色谱峰形,一些在传统硅胶基质色谱柱上峰形很差的样品,在该色谱柱上都能得到对称的色谱峰形。Hypersil GOLD固定相具有传统C18的选择性和洗脱顺序,同时具有新的优点,如峰形的改善,峰容量的增加,以及灵敏度的提高,特别是在痕量物质的分离分析中改善尤为显著。
特点:
固定相
Hypersil
GOLD 粒度(μm) 碳含量(%) 孔径(?) 封尾 3、5、8 10 175 是硅胶类型高纯去活硅胶
无与伦比的峰形
碱性药物成分若要获得良好的分辨
敏度,对称的峰形是很关键的。
Hypersil GOLD色谱柱采用独特的键
可以确保获得最好的峰形,从而保证
结果的质量和准确度的可靠性。
率和灵合技术,所得到
提高分辨率
由于被分析物容易于固定相发生作用,色谱峰通常是非高斯峰。这种不对称的峰形可导致峰高的降低,定量