黑曲霉的分离.doc

黑曲霉的分离
一、实验简介
黑曲霉广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中。黑曲霉的最适温度为37℃,黑曲霉对营养要求较低,只要培养基中含有碳源、氮源及磷、钾、镁、硫等元素即能生长良好,实验中采用察氏培养基进行培养。
黑曲霉的菌落蔓延迅速,但生长稍局限,菌丝初为白色,后变成鲜黄色直至黑色厚绒状,背面无色或中央略带黄褐色。顶部形成球形顶囊,其上全面覆盖一层梗基和一层小梗,小梗双层褐色,梗基较短,上长有成串褐黑色的球状分生孢子。~。分生孢子头球状,直径700~800μm,褐黑色。
黑曲霉的个体形态和菌落形态都比较特殊,容易分辨,可利用平板划线法或稀释涂布法,得到单菌落,并结合显微镜检测,多步鉴定、纯化,得到的纯的菌种。
二、实验试剂与材料
1、材料:黑曲霉孢子悬浮液
2、溶液和试剂: ***钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、***化钾、硫酸亚铁、蔗糖、琼脂、1mol/L氢氧化钠溶液、1mol/L***化氢溶液、75%乙醇、乙醇***混合液、溴甲酚绿、水。
3、器材和其他用品: 三角瓶、试管、搪瓷杯、培养皿、接种环、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅、试管架、载玻片、盖玻片、光学显微镜、恒温培养箱、纱布、牛皮纸、滤纸、
pH试纸、擦镜纸。
三、实验步骤和过程
1、无菌器材及无菌水的准备
培养皿:洗净的培养皿烘干后,每组将5套培养皿叠在一起,用报纸卷成一筒,然后进行灭菌。注意,一定要卷紧。
试管:做合适的棉塞,每组捆扎5支试管,用报纸包在一起后,用线绳扎紧,扎成活结,另一头再用皮筋扎好,然后进行灭菌。
三角瓶:在三角瓶瓶口塞一八层纱布,盖上牛皮纸,用线绳扎成活结,然后
进行灭菌。注意,装入的培养基不超过三角瓶的1/2。
上述物品均要用记号笔注明班级、组别、日期。
高压蒸汽灭菌
2、查氏培养基的配制
称量→熔化→定容→调pH→分装→加塞→包扎标记→灭菌→搁置斜面与倒平板→无菌检查
培养基配方:***钠 3g 磷酸氢二钾 1g 硫酸镁(MgSO4·H2O) ***化钾
硫酸亚铁 蔗糖 30g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml -
称量:按照培养基配方,依次准确地称取药品,放入搪瓷杯中。
熔化:量取自来水,加入所需水量的一部分至上述搪瓷杯中,用玻璃棒搅拌,待药品溶解后,加入琼脂,倒入余下的水,在电热板上加热熔化。
:将加热后的培养基导入量筒中,用自来水进行定容,至1000ml。
调pH:待培养基稍冷却后,用精密pH试纸测量培养基的原始pH,若偏酸,用1mol/L NaOH边滴加边搅拌,-。若偏碱,则用1mol/L HCl调节。
分装:用分装装置将培养基装入试管,高度为试管总长的1/5,共20支。余下培养基转入三角瓶中,培养基的量为三角瓶容量的1/3-1/2。
加塞、包扎、标记:试管加棉花塞,5支一捆包扎好,棉塞外加一层报纸防灭菌时冷凝水湿润棉塞,在外用线绳扎成活结,;三角瓶用纱布塞住瓶口,并用牛皮纸的线绳包扎好。用记号笔注明培养基名称、班级、组别、配制日期。
灭菌:,121℃,20min高压蒸汽灭