褪黑素对大鼠慢性压迫脊髓损伤Caspase3表达及细胞凋亡的影响论文.doc

褪黑素对大鼠慢性压迫脊髓损伤Caspase3表达及细胞凋亡的影响论文.doc褪黑素对大鼠慢性压迫脊髓损伤Caspase3表达及细胞凋亡的影响论文
潘文杰汪玉良王栓科夏亚一贺艳李延宏王景
【摘要】目的:探讨褪黑素(MT)对大鼠慢性压迫脊髓损伤半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达和细胞凋亡的影响. 方法:将70只大鼠建立慢性压迫损伤动物模型,随机分为MT治疗组(A 组)和含50 mL/L无水乙醇的生理盐水对照组(B 组),于损伤1,4,11,21,35,60和90 on expression of caspase3 and apoptosis in chronic pression spinal cord injury in rats. METHODS: The chronic pression spinal cord injury model ale T)是松果体分泌的一种激素,研究发现其具有强大的自由基清除作用,对脑损伤、帕金森病、外周神经损伤等多种神经系统疾病有保护作用[3],,腹腔注射MT,通过观察其对细胞凋亡和半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)表达的影响,进一步探讨MT保护神经细胞的作用机制.
1材料和方法

220~280 g健康成年雄性T(美国Sigma公司),用无水乙醇溶解,.freelL/L;兔抗鼠Caspase3 p20亚单位一抗, 原位末端标记(TUENL)试剂盒,SABC免疫组化染色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司).


将70只大鼠随机分为脊髓压迫+MT治疗组(A组)和脊髓压迫+含50 mL/L无水乙醇生理盐水对照组(B组),每组动物35只.

70只大鼠用100 mL/L水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉,常规消毒铺巾,以椎体T10为中心取后正中切口,明确及咬除T10棘突及部分椎板,置入平头塑料螺钉对大鼠脊髓进行渐进性后路压迫[4](在螺钉中央钻孔插入细银丝以便于影像学观察),以后每隔10~15 d显露螺钉,~ mm,共5~(constrictive rate of spinal canal, CR) 即压迫物占椎管矢状径的百分比,同时观察脊髓受伤平面以下的神经功能状况,定期行受压脊柱脊髓影像学检查,直至脊髓受压程度达40%~60%(中度程度压迫).分别于损伤1,4,11,21,35,60和90 d取材,每组各时相点5只动物.

A组: 在暴露的硬膜下注射MT(5 mg/kg),伤后即刻经腹腔注射MT(10 mg/kg),之后每日11:00经腹腔注射同等剂量MT 1次. B组: 注射方法同A组,给予等量的含50 mL/L无水乙醇生理盐水作为对照治疗.

A,B两组各时相点动物处死前分别行改良的Tarlov评分、斜板试验,对大鼠进行行为及肢体运动功能检查,观察慢性压迫脊髓损伤各时相点大鼠后肢活动、肌力等的变化,以此评定MT对大鼠慢性压迫脊髓损伤脊髓神经功能的影响.

将两组大鼠在各相应取材时间点用100 mL/L水合氯醛(350 mg/kg)腹腔