免疫透射比浊实验 2.ppt

免疫透射比浊实验_2医学免疫学实验
第二次试验
余小艳(1110150306)
孙志荣(1110150307)
彭荣(1110150308)
陈超(1110150309)
赖娟(1110150311)
免疫透射比浊试验
【实验目的】
通过本实验了解透射比浊法的基本原理。掌握半自动或全自动生化分析仪的使用。
当光线通过一个浑浊介质溶液时,由于溶液中存在混浊颗粒,光线被吸收一部分,吸收的多少与混浊颗粒的量成正比,这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物,导致浊度的改变,再进行透射比浊测定,一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法,称为免疫透射比浊法。
实验原理:
免疫比浊实验:在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原,经一定时间后形成可溶性免疫复合物,在PEG作用下可自液相析出,形成微粒,使检样浊度发生变化,用浊度计测量反应液体的浊度,复合物形成越多浊度越高,绘制标准曲线,根据浊度推算样品的抗原含量。
免疫透射比浊法:可溶性抗原与抗体在比例合适时形成抗原抗体复合物,在PEG作用下自液相析出,形成微粒,使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时,形成的复合物随抗原量增加而增加,反应液浊度亦随之增加,即反应液浊度与其中的抗原量呈正比。
【实验材料】
羊抗人IgG、IgA、IgM抗血清及标准Ig参考血清
抗原:待测人血清参考血清
抗体:羊抗人IgG、IgA、IgM血清
PEG-NaF稀释液
1ml刻度吸管、微量加液器、小试管、水浴箱、半或全自动生化分析仪等
3.
管号测IgG 抗体空白管
-NaF稀释液(ml)
2抗血清(ul)(效价1:100) ——
3待测血清(ul)
管号测IgM 抗体空白管
-NaF稀释液(ml)
(ul)(效价1:100) ——
(ul)
混匀,37℃水浴30min,340mm波长以抗体空白管调零,按终点法读取各管光密度
,按上述操作步骤进行,测定各管吸光度,以光密度对浓度进行回归处理,作标准曲线。由测定管A值再计算出待测血清中的免疫球蛋白的含量。
【计算】
血清补体lgG含量(g/L)=(测定管A值/标准管A值)
注意事项
测定管的条件和空白管的要相同
测IgG要用生理盐水稀释而IgM血清不稀释
注意自动分析仪检测的使用方法